[发明专利]一种叶酸-蒜酶缀合物及其制备方法

说明书

本发明属于有机合成领域。本发明提供了一种叶酸‑蒜酶缀合物和两种制备所述叶酸‑蒜酶缀合物的方法。本发明以叶酸作为蒜酶载体，分别采用碳二亚胺活化法、碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺联用活化法来合成一种新的叶酸类缀合物——叶酸‑蒜酶缀合物。根据实施例结果可知，本发明能够成功制备叶酸‑蒜酶缀合物，且所得叶酸‑蒜酶缀合物的靶向性良好，能够与肿瘤细胞结合；所述叶酸‑蒜酶缀合物在体外条件下对靶细胞具有良好的特异性识别功能。

技术领域

本发明涉及有机合成技术领域，尤其涉及一种叶酸-蒜酶缀合物及其制备方法。

背景技术

大蒜是多年生百合科葱属植物蒜(Allium sativum L.)的地下鳞茎，具有悠久的医药和食品历史。大蒜的化学成分主要包括含硫有机化合物和皂苷类，含硫有机化合物是大蒜重要的活性物质，主要是蒜氨酸和大蒜辣素。蒜酶(alliinase)是大蒜中一种二聚体糖蛋白，可催化合成具有多种生物活性的大蒜辣素。

叶酸受体是一种肿瘤相关蛋白，它可以通过内吞摄入叶酸以及叶酸衍生物。叶酸受体在超过90％的卵巢癌、肾癌、肺癌和乳腺癌以及其他妇科癌症中均高度表达，而在正常组织中的表达高度保守。叶酸的缺乏可以导致乳腺癌、卵巢癌等人体肿瘤的发生。叶酸受体(folate receptors，FR)是目前研究较热的靶点之一，具有较高的组织特异性，能与叶酸特异性结合。叶酸是一种配体，能够靶向共价结合的生物活性物质。利用叶酸作为药物载体与药物结合的靶向给药系统正倍受关注。研究发现，叶酸受体主要是识别叶酸中的蝶酸部分，谷氨酸残基对受体识别的影响不大，所以载体部分可以看做是叶酸中的蝶酸，利用谷氨酸与药物键合形成叶酸-药物缀合物。

目前，现有技术中以叶酸作为载体的缀合物的种类还很少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种叶酸-蒜酶缀合物，拓展叶酸缀合物的种类。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种叶酸-蒜酶缀合物，其结构式如式Ⅰ所示：

本发明提供了一种所述叶酸-蒜酶缀合物的制备方法，包含如下步骤：

(1)将叶酸溶于磷酸盐缓冲液中得到叶酸溶液；

(2)将所述叶酸溶液和碳二亚胺盐酸盐混合进行加成反应，得到加成产物体系；

(3)将蒜酶溶于磷酸盐缓冲液中得到蒜酶溶液；

(4)将所述加成产物体系和所述蒜酶溶液混合进行酰胺化反应，生成叶酸-蒜酶缀合物；

步骤(1)～(2)和步骤(3)无先后顺序限制。

优选的，所述步骤(1)和步骤(3)中的磷酸盐缓冲液的pH值独立地为7～8；

所述步骤(1)中叶酸的质量和磷酸盐缓冲液的体积之比为(20～40)mg:(1～5)mL；

所述步骤(3)中蒜酶的质量和磷酸盐缓冲液的体积之比为(140～160)mg:(8～12)mL；

所述步骤(1)中叶酸和步骤(3)中蒜酶的质量比为(20～40):(140～160)。

优选的，所述步骤(2)中碳二亚胺盐酸盐和步骤(1)中叶酸的质量比为(70～80):(20～40)；

所述加成反应在室温下进行，时间为20～40min。

优选的，所述步骤(4)中酰胺化反应在室温下进行，时间为1～3h。

本发明提供了另外一种所述叶酸-蒜酶缀合物的制备方法，包含如下步骤：

(1)将叶酸溶于磷酸盐缓冲液中得到叶酸溶液；