[发明专利]一种用于快速鉴定鸽性别的引物、试剂盒及其方法

说明书

本发明提供了用于快速鉴定鸽性别的引物、试剂盒及其方法。所述引物对序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，该引物针对鸽子CHD基因序列设计的，具有特异性强，准确率高，分辨率好等优点；扩增结果直接进行琼脂糖凝胶电泳，具有更高的辨识度，使得扩增结果直观清晰，极易分辨出鸽性别。本发明还提供了利用所述引物鉴定鸽性别的分子鉴定方法，该方法在利用上述引物特异性扩增的前提下，还提供了高效核酸裂解液，极大地简化羽髓样品DNA的获得过程，降低了鸽性别鉴定的时间和经济成本。利用所述PCR‑琼脂糖电泳技术和基因分型方法确定鸽性别的方法和试剂盒，操作简单，鉴别速度快，成本低廉，具有广泛的市场利用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速鉴定鸽性别的引物、试剂盒及其方法。

背景技术

鸽子属于单态鸟，其雌雄外貌形态差别甚微，无论是雏鸽还是成年鸽都很难从外观形态或其他行为上加以区分。性别鉴定在鸽子育种和控制养殖成本中尤为重要。如果性别比例不当，不利于产业化饲养管理与繁殖育种；不同性别的个体其营养需求也不同，尤其在“双母配对”模式的蛋鸽产业中更为突出。因此，早期的性别鉴定将有助于满足生产需求，具有重要实践意义和经济价值。

目前用于鸽子性别鉴定的传统方法主要有翻肛法、腹腔镜检法、体尺测量法和粪便类固醇检测等，鉴别准确率低，耗时耗力，且伤害性大。现有技术中存在的一些鉴定鸽子性别的引物和方法，但公开的引物一些仅仅是扩增出一条带，有的引物的两条扩增条带太近，不易分辨，特异性不好，甚至出现假阴性的可能，给规模养鸽生产造成极大损失。

发明内容

为了解决上述鉴定鸽子性别的引物和方法的特异性不好，不易分辨及易出现假阴性等技术问题，本发明提供一种用于快速鉴定鸽性别的引物、试剂盒及其方法。本发明还提供了一种快速的样品裂解DNA提取试剂。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：

一种用于快速鉴定鸽性别的引物，该引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物序列如SEQ ID No.2所示。

一种用于快速鉴定鸽性别的试剂盒，其包括如上所述的引物。

如上所述的试剂盒，优选地，还包括PCR反应液、DNA提取液。

如上所述的试剂盒，优选地，所述DNA提取液包括裂解液A和裂解液B，所述裂解液A为NP40-PBS缓冲液，所述裂解液B为TE缓冲液。

NP40-PBS缓冲液中的NP40的体积浓度为1％，PBS的pH值7.4，其配制方法为0.01mol/LNa₂HPO₄，0.8％NaCl，0.02％KCl，0.024％KH₂PO₄，1％NP40；

TE缓冲液的TE的pH值为8.0，其的配制方法为10mmol/L Tris.Cl,1mmol/L EDTA。

一种用于鉴定鸽性别的PCR试剂，由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对、2×PermixTaq、双蒸水组成，其中所述引物对中各引物在所述的PCR试剂中的终浓度均为0.2μmol/L，所述2×PermixTaq Mix在所述的PCR试剂中终浓度为1×PermixTaq。

采用该PCR试剂只需要再加入鸽的羽毛或血液提取的DNA，进行PCR扩增，即可对待测鸽的性别进行鉴定。

一种用于快速鉴定鸽性别的方法，包括以下步骤：

S1、提取鸽的羽髓或血液样品中的DNA；

S2、采用如上所述上游引物和下游引物，对步骤S1获得的DNA进行PCR扩增反应；