[发明专利]一种用于快速鉴定鸽性别的引物、试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种用于快速鉴定鸽性别的引物，该引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物序列如SEQ ID No.2所示。

2.含有权利要求1所述引物的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应液、DNA提取液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA提取液包括裂解液A和裂解液B，所述裂解液A为NP40-PBS缓冲液，其中，NP40的体积浓度为1％，PBS的pH值7.4；所述裂解液B为TE缓冲液，pH值为8.0。

5.一种用于鉴定鸽性别的PCR试剂，其特征在于，由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对、2×PermixTaq、双蒸水组成，其中所述引物对中各引物在所述的PCR试剂中的终浓度均为0.2μmol/L，所述2×PermixTaq Mix在所述的PCR试剂中为终浓度为1×PermixTaq。

6.一种用于快速鉴定鸽性别的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提取鸽的羽髓或血液样品中的DNA；

S2、采用如上所述上游引物和下游引物，对步骤S1获得的DNA进行PCR扩增反应；

S3、对步骤S2获得的PCR扩增产物采用凝胶电泳分析进行结果判定：

若扩增产物在448bp和635bp位置同时出现两条电泳条带、或在448bp位置出现一条电泳条带，则为雌性；

若扩增产物只在635bp位置出现一条电泳条带，则为雄性。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤S1的操作包括选择鸽子羽毛样品，则收集羽髓，或鸽子血液样品，并与裂解液A混合，95℃，加热10分钟，再加入裂解液B，取上清液即获得鸽的羽髓或血液样品的基因组DNA，其中，所述裂解液A为NP40-PBS缓冲液，所述裂解液B为TE缓冲液。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述PCR扩增反应的体系包括：1.5μLDNA模板，10μL2×PermixTaq、如权利要求1所述引物的终浓度各为0.2μmol/L，用双蒸水补齐20μL。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述PCR扩增反应的程序为：95℃，预变性5min；延伸按94℃，10s，50℃，30s，72℃，40s进行30个循环；72℃，保温7min，16℃结束。

10.根据权利要求6-9中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，同时采用如SEQID No.3所示序列作为雌性阳性对照；和/或采用如SEQ ID No.4所示序列作为雄性阳性对照；采用无菌水作为阴性对照。