[发明专利]一种抗肿瘤化合物的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种抗肿瘤化合物的制备方法及其应用。该化合物属于对三联苯类型，通过分离来自海南文昌红树林链霉菌219807菌丝体部分的活性次级代谢产物获得对三联苯类化合物BTH‑II0204‑207:B。该化合物具有很强的抑制乳腺癌细胞MCF‑7、人体肝癌体外细胞Bel7402和人口腔表皮样癌细胞KB的作用，可用于制备抗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于微生物药物领域，具体涉及一种活性化合物BTH-II0204-207:B的制备方法与应用。

背景技术

三联苯芳香烃类化合物的结构中含有3个苯环，根据苯环连接的位置不同分为邻/间/对三种异构体，此类化合物结构多变，活性显著。其中，对三联苯类化合物大多分离自真菌，来自于链霉菌的约有10个化合物。此类化合物具有细胞毒、抗氧化、抗菌、抗凝、神经保护、免疫抑制和脂氧合酶抑制等生物活性。本发明中BTH-II0204-207:B属于对三联苯类化合物，该化合物作为天然产物首次分离自一株单操纵子诱导表达的B.pseudomalleiK96243(Biggins,J.B.；Liu,X.；Feng,Z.；et al.Metabolites from the inducedexpression of cryptic single operons found in the genome of Burkholderiapseudomallei.J.Am.Chem.Soc.2011,133,1638-1641.)。从结构上看，该化合物是首次从链霉菌中得到，在迄今已有的报道中，尚未涉及到与本发明相同的具有抑制乳腺癌细胞MCF-7、人体肝癌体外细胞Bel7402和人口腔表皮样癌细胞KB的作用。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种来源于红树林链霉菌219807的对三联苯类化合物BTH-II0204-207:B的制备方法。

本发明的另一目的在于提供对三联苯类化合物BTH-II0204-207:B在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明提供一种利用红树林链霉菌219807制备对三联苯类化合物BTH-II0204-207:B的方法，所述BTH-II0204-207:B的结构式见式Ⅰ，准分子离子峰m/z 293.1173(计算值[M+H]⁺293.1099)，分子式为C₁₉H₁₆O₃，

所述的化合物BTH-II0204-207:B是从红树林链霉菌219807的发酵培养物中制备得到，所述的红树林链霉菌219807是来源于中国海南省三亚红树林土壤，保藏编号为CCTCCNO.M2015276。

优选地，具体包括如下步骤：

(1)将红树林链霉菌219807经固体培养基活化后接种于ISP2液体培养基中进行培养，培养条件为28℃、220r/min振荡培养3d，之后以10％的接种量接种到DO培养基中，在28℃、220r/min振荡条件下培养8d；DO培养基的配方为：葡萄糖10g/L，糊精25g/L，燕麦粉20g/L，棉籽饼粉10g/L，鱼粉5g/L，酵母提取物2g/L，CaCO₃ 3g/L，pH值为6.0；

(2)将步骤(1)所得的发酵液利用离心的方法使得固液分离，菌丝体部分用丙酮超声破壁三次，将合并的提取液减压浓缩至不含丙酮后，用乙酸乙酯进行萃取三次，浓缩得到菌丝体部分的粗提物；

(3)将步骤(2)获得的粗提物在正相硅胶柱层析中以环己烷和丙酮为洗脱液进行梯度洗脱，比例依次为环己烷：丙酮＝9:1、7:1、5:1、3:1、7:3、3:2、1:1、2:3、1:3、1:5，每个梯度洗脱体积为1.5L，共获得十个洗脱组分，分别减压浓缩；