[发明专利]绵羊ZFY基因单核苷酸多态性标记的检测方法及标记应用

说明书

本发明公开了绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的检测方法及标记应用。该标记是绵羊ZFY基因片段第403位的G或A的单核苷酸多态性。检测引物包括正向引物和反向引物，分别为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。检测方法包括：提取待测公绵羊全基因组DNA；以待测公绵羊全基因组DNA为模板，以母羊DNA为阴性对照，以水为空白对照，利用检测引物进行 PCR 扩增绵羊ZFY基因；用限制性内切酶Bsp1286 消化PCR扩增产物之后，再对酶切后的扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳；根据电泳结果鉴定绵羊ZFY基因上单核苷酸多态性位点的基因型。

技术领域

本发明涉及分子遗传学领域，具体是绵羊ZFY基因单核苷酸多态性标记的检测方法及标记应用。

背景技术

哺乳动物性染色体起源于爬行动物常染色体，是由一对常染色体进化而来的。常染色体经过不断地分化和进化，形成X染色体。

Y染色体是最小的染色体，约占单倍体基因组的2％-3％，并且可能包含70到200个基因。在进化过程中，一些功能基因缺失，Y染色体退化，与睾丸及精子生成有关的多拷贝基因大量在长臂上富积并保留下来，形成一个雄性特异区MSY(male-specific region onthe Y)，约占Y染色体的95％。而只有位于Y染色体末端的拟常染色体区域(Pseudoautosomal region,PAR)在减数分裂的过程中与X染色体发生重组，交换遗传物质。哺乳动物Y染色体，由两部分组成：拟常染色体区域和Y染色体雄性特异区组成。MSY区由常染色质区和异染色质区组成，常染色质区由X转位区(X-transposed)、X退化区(X-degenerate)和扩增区(ampliconic)组成。X退化区由单拷贝基因组成，它们虽然在减数分裂过程中不与X染色体发生重组，但是与X染色体上的同源基因具有较高的同源性。MSY区的遗传标记，即父系遗传的单倍型，被用于研究动物群体的父系起源、动物的迁徙、种群扩大以及基因渗入的研究。哺乳动物Y染色体(MSY)的雄性特异性区域的基因在性别决定、雄性繁殖及发育方面有重要的功能。拟常染色体区域由2部分组成(PAR1和PAR2)，约占整个染色体的5％，在X染色体上与同源区域；Y染色体雄性特异区，又称Y染色体非重组区域(non-recombining region on Y,NRY)，不与X染色体发生重组。PAR1位于短臂的末端区域(Yp)，长约2600kb；PAR2在长臂的顶端(Yq)，长约320kb。

ZFY基因即Y连锁的锌指蛋白因子(zinc finger protein,Y-linked)，位于Y染色体短臂(Yp11.3)上，由11个外显子和1个随机重复区域的13个“锌-指”结构组成，在雄性动物睾丸的生长发育过程中发挥作用，

该基因同源基因ZFX基因进入减数分裂时期开始表达，直至圆形精子细胞表达量最高。其被认为是性别分化，精子发生以及生殖生长发面重要的基因。ZFX基因包括核定位信号区和DNA结合位点，能特异结合靶基因，引导靶基因穿过核膜，定位在精子细胞核内。

毛德才研究发现牦牛、猩猩、人、牛等9个物种ZFX/ZFY间的核苷酸序列有较高同源性。熊勇等研究表明藏系绵羊ZFY基因与猪、摩弗伦羊、狼、人类等其他物种之间具有很高的同源性。LAWSON等通过进化树分析发现：绵羊ZFY与岩羊、山羊、牛ZFY的亲缘关系较近。ARKADI克隆得到了整个牛ZFY基因整个编码区及马和猪ZFY基因编码区部分序列，通过比对发现ZFY基因编码区在3个物种的同源性较高。前期研究发现绵羊ZFY3和ZFY6片段与岩羊、山羊、牛、牦牛等物种间同源性大小在89.11％-99.6％，表明该基因在不同物种间也具有较高的同源性，与前人的研究基本一致。AASEN等人在利用ZFY片段的扩增及酶切来鉴别人，牛，绵羊和山羊的胚胎性别，该研究的结果也可用于绵羊胚胎性别的早期鉴定。

关于绵羊ZFY基因序列扩增和SNPs筛选的研究尚未见报道。

发明内容