[发明专利]绵羊ZFY基因单核苷酸多态性标记的检测方法及标记应用

权利要求书

1.一种绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的检测方法，其特征在于：所述标记为绵羊ZFY基因片段第403位的G或A的单核苷酸多态性，所述检测方法包括以下步骤：

S1. 提取待测公绵羊全基因组DNA；

S2. 以待测公绵羊全基因组DNA为模板，以母羊DNA为阴性对照，以水为空白对照，利用检测引物进行 PCR 扩增绵羊ZFY基因，得到扩增产物，并于低温保存；

S3. 用限制性内切酶Bsp1286I消化PCR扩增产物之后，再对酶切后的扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳；根据电泳结果鉴定绵羊ZFY基因上单核苷酸多态性位点的基因型。

2. 根据权利要求1所述的一种绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的检测方法，其特征在于：所述检测引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物和所述反向引物分别为如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

3. 根据权利要求2所述的一种绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的检测方法，其特征在于：在所述S2中，在利用所述检测引物进行 PCR 扩增绵羊ZFY基因时，需先配制反应体系：

Tks Gflex DNA Polymerase 12.50 µL，0.2 µM的正向引物0.5 µL，0.2 µM的反向引物0.5 µL，灭菌蒸馏水10.5 µL，DNA模板50 ng。

4. 根据权利要求2或3所述的一种绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的检测方法，其特征在于：在所述S2中，所述PCR 扩增控制过程为：94℃预变性1 min；98℃变性10 s，58℃退火15 s，72℃延伸30 s，30个循环；72℃终延伸1 min。

5.根据权利要求2所述的一种绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的检测方法，其特征在于：在所述S2中，低温保存环境选择4℃。

6.根据权利要求1所述的一种绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的检测方法，其特征在于：在所述S3中，所述琼脂糖凝胶电泳过程采用的琼脂糖凝胶的质量浓度为1%。

7.一种绵羊ZFY基因的单核苷酸多态性标记的应用，其特征在于：所述标记为绵羊ZFY基因片段第403位的G或A的单核苷酸多态性，将该标记在绵羊辅助选择和分子育种中应用。