[发明专利]一种丛枝菌根真菌的野外扩繁方法

说明书

本发明公开了一种丛枝菌根真菌的野外扩繁方法，包括以下几个步骤：1）对扩繁基质进行消毒。将基质土壤均匀铺平，暴露于太阳光下，并喷洒50%多茵灵可湿性粉剂，暴晒直至完全干透。2）将丛枝菌根真菌与扩繁宿主种子共同制为丸衣化种子，接种于消毒后的基质。3）养护3~4个月后即可收获基质作为菌剂。本发明将种子包衣技术与丛枝菌根接种技术有机结合，简化了接种过程，使实际操作更为简便，且该技术的应用使菌剂与种子接触更紧密，可以节约丛枝菌根菌剂的施用。

技术领域

本发明属于菌根真菌扩繁技术领域，特别是一种丛枝菌根真菌的野外扩繁方法。

背景技术

丛枝菌根（Arbuscular mycorrhizae,AM）真菌是土壤共生真菌中分布最为广泛的一类真菌。丛枝菌根真菌具有能够提升宿主植物的生物学功能指标，并增强宿主植物对逆境的耐受能力，因此常被用作生态恢复技术的材料。目前培养丛枝菌根真菌的方法主要有以下几类：

单孢培养法，是一种利用半水培技术和湿筛分离技术分离出纯净的孢子，并再次接种于扩繁宿主幼苗根部以获得单一菌种纯净菌系的方法。其优点为获得的菌种为单一孢子繁殖而来，为单一纯系，但其对于无菌环境及无菌操作要求较高，并且难以大批量进行，因此只适用于对菌剂需求量较少的实验性扩繁。

根器官培养法，即采用两室培养系统同时进行根器官和丛枝菌根真菌的培养。两室培养系统可以阻隔两边培养基之间的物质交换，使菌根室中仅能培养植物根及丛枝菌根真菌孢子，菌丝室中则只有菌丝，没有根器官。这种方法的优势在于可以原位观察丛枝菌根真菌的生长状况，但也受到了量的局限。

分室玻璃珠培养法，利用尼龙网将器皿隔为几室，中间填充玻璃珠，使菌丝可以穿过尼龙网进入玻璃珠室，阻隔了除菌丝外其它污染物的进入。该方法简化了纯净菌丝的收集，但由于装置的复杂性难以大规模的收集菌剂。

诱集培养法，将野外采集到的包含丛枝菌根真菌的土样，或进行单孢分离后的培养物和扩繁宿主一起接种于沸石、河沙混合基质，浇灌霍格兰茨营养液，养护后可获得其加富培养物。这种方法较为简便，但通常利用盆栽法在无菌室内进行，且由于基质粒径较大，保水性能差，对于人工养护的要求也比较高。

尽管丛枝菌根真菌在生态修复技术中具有明显优势，但由于其扩繁培养方式的局限，常常难以满足实际工程的需要。因此，研究出一种可以大批量生产，适用于工程应用的扩繁方法对于丛枝菌根修复技术的普及化十分重要。

发明内容

本发明的目的是针对以上问题，提供一种丛枝菌根真菌的野外扩繁方法，环境和技术要求较低，且能获得大批量丛枝菌根菌剂，可满足实际工程应用的需要。

本发明技术方案：

一种丛枝菌根真菌的野外扩繁方法，所述方法包括如下步骤：

1）将基质土壤过2mm筛后平铺于硬质地面，直接暴露于阳光下，将50%多茵灵可湿性粉剂喷洒于基质土壤，边喷洒边翻拌；使其良好渗透。

2）将暴晒后完全干透的基质土壤在通风透气环境下放置一周左右后，将其铺于试验田，深度为20~25cm；

3）丛枝菌根真菌接种：利用丛枝菌根菌剂制丸衣剂，对扩繁宿主种子进行接种处理；

4）将接种处理后种子均匀播撒在基质土壤上，并覆土2~3cm；

5）养护3~4个月后，收获的基质土壤及扩繁宿主植物根系即为野外扩繁所得菌剂。

优选地，所述步骤1）基质土壤为河沙：田间土按照质量比为1:1-1.5混合的沙壤土。

优选地，所述步骤3）所述扩繁宿主种子为：玉米Zea mays Linn.或高粱Sorghum bicolor (L.) Moench。