[发明专利]鲍鱼肽PIR及其合成方法与应用

说明书

本发明公开了一种鲍鱼肽PIR及其合成与应用，所述鲍鱼肽PIR的序列为：GDLADGVGEGALDEAGLLAV。本发明同时公开了所述鲍鱼肽PIR的合成方法，所述方法包括根据Fmoc‑固相多肽合成法合成鲍鱼肽粗品。本发明所述鲍鱼肽PIR具有极强的免疫能力和应激能力，在养殖业中有广泛的应用，且随着研发的深入，其也可作为在制备药品或保健品方面的应用，具有理想的提高免疫力和应激力等的效果。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种鲍鱼肽PIR及其合成方法与应用。

背景技术

鲍鱼自古被誉为海味珍品之冠，素有“一口鲍鱼一口金”之说，其鲜品可以食用的部分蛋白质24％，脂肪0.44％；干品含蛋白质40％，糖元33.7％，脂肪0.9％以及多种维生素和微量元素，是一种对人体非常有利的高蛋白，低脂肪食物。还因其富含谷氨酸，味道非常鲜美，也被誉为“餐桌黄金，海珍之冠”。

多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，具有安全、副作用小、用量小、功能多样、特异性强等特点，在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用。肽具有极强的活性和多样性，可全面调节人体生理功能，增强人体生理活性。

目前已通过诸如酶解法、膜分离等技术分离得到多种鲍鱼多肽，然而尚未有对鲍鱼多肽进行进一步研究的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有极强活性的鲍鱼肽PIR。所述鲍鱼肽PIR为含有20个氨基酸的线性多肽，其序列为：GDLADGVGEGALDEAGLLAV。所述鲍鱼肽PIR的高效液相色谱图谱如图1所示。

为实现上述目的，本发明同时还提供了一种鲍鱼肽PIR的合成方法。具体地，该方法即根据Fmoc-固相多肽合成法合成鲍鱼肽粗品。

优选地，所述Fmoc-固相多肽合成法中，以王氏树脂为固相载体，依次以二甲基氨基吡啶DMAP\DIC及HOBT\TBTU\DIEA为催化剂，二甲基甲酰胺DMF为溶剂和清洗剂，三氟乙酸TFA、茴香硫醚Thioanisole和H₂O为切割试剂，进行所述鲍鱼肽的合成。

优选地，所述Fmoc-固相多肽合成法中，使用Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH和Fmoc-Glu(OtBu)-OH作为合成氨基酸来分别将Gly、Asp、Leu、Ala、Val和Glu偶联到肽链上，按照肽序列依次连接，直至最后一个氨基酸Val的连接。

优选地，所述Fmoc-固相多肽合成的步骤如下：

1)用DCM浸泡王氏树脂1h-5h，以将其活化；

2)根据Fmoc-固相多肽合成法，以王氏树脂为固相载体，连接第一个氨基酸到树脂(在固相多肽合成器中进行，下同，此时以二甲基氨基吡啶DMAP\DIC为催化剂)；

3)加入哌啶脱去Fmoc-基团，使第一个氨基酸的氨基游离出来，恢复反应活性；

4)以HOBT\TBTU\DIEA为催化剂，DMF为溶剂及清洗剂，进一步连接第二个氨基酸；

5)以同样方法连接其他的氨基酸，连接完所有氨基酸后洗涤并用氮气将树脂吹干；

6)用切割试剂将肽从树脂上切割下来；经后处理即得。

优选地，步骤3)中所述哌啶以20％哌啶的DMF溶液加入。该20％哌啶的DMF溶液能够很好的脱除Fmoc保护集团，具有脱除反应速度快、脱除效果好的优点，当哌啶含量过大时会因反应过于剧烈而出现副反应，这样不利用脱除后的洗涤。

优选地，步骤4)中所述的催化剂为重量比1:1:1-1:5:5的HOBT\TBTU\DIEA；该催化剂能够加快反应时间，具有缩合效率高、反应速度快、不易发生消旋化反应的优点。