[发明专利]利用离体叶片快速鉴定辣椒单株对胶孢炭疽病抗性的方法

权利要求书

1.一种利用离体叶片快速鉴定辣椒单株对胶孢炭疽病抗性的方法，其特征在于，该方法采用辣椒幼苗期离体带柄的功能叶作为待测样品；

取胶孢炭疽病病原菌并接菌到待测样品的叶片背面；然后将待测样品置于28±2℃人工气候箱中，黑暗培养48h后，得到病斑样品，测量病斑样品的病斑直径；

所述的待测样品为辣椒12～13叶幼苗期。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

步骤一，选择辣椒抗病品系R25为抗病对照，辣椒感病品系R24作为感病对照，选取抗病对照的辣椒种子和感病对照的辣椒种子；

步骤二，将对胶孢炭疽病抗性未知的辣椒种子、抗病对照的辣椒种子和感病对照的辣椒种子分别进行培养种植；待辣椒幼苗长至12～13片真叶时，选取辣椒子叶上方生长正常、带叶柄并且充分展开的功能叶，获得抗病对照的辣椒幼苗期离体带柄的功能叶、感病对照的辣椒幼苗期离体带柄的功能叶和对胶孢炭疽病抗性未知的辣椒幼苗期离体带柄的功能叶，均作为待测样品；

步骤三，对每个待测样品用蘸饱灭菌水的棉花包裹叶柄，玻璃皿底部铺一层滤纸，用灭菌水将滤纸打湿，将叶片放在打湿的滤纸上，叶背朝上，胶孢炭疽病病原菌在PDA培养基上生长4～7天，用直径为5mm的打孔器取菌落边缘的菌块，并接菌到叶片背面；然后将待测样品置于28±2℃人工气候箱中，黑暗培养48h后，得到病斑样品，测量病斑样品的病斑直径。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤二中，所述的培养种植过程为将辣椒种子经55℃温汤浸种20min，清水浸泡5h，28℃、全黑暗人工气候箱中进行催芽，经4d种子露白，播于穴盘中；然后将穴盘置于昼夜温光周期条件下进行培养，所述的昼夜温光周期条件为：相对湿度60％～80％，光照3000～4000lx，白天温度25℃～30℃，16h，夜间温度18℃，8h，培养期间浇Hoagland's营养液。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤三中，所述的病斑直径采用十字交叉法测量，每个病斑测量两个直径，取两个直径的平均值。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括以下步骤：

步骤四，根据病斑直径，按照辣椒离体叶片抗病性鉴定分级标准，统计待测样品的辣椒单株叶片级数，然后计算病情指数；

步骤五，根据病情指数，然后按照单株抗病性分级标准确定待测辣椒单株的对胶孢炭疽病抗性。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤四中，每个待测样品为3片辣椒12～13叶幼苗期离体带柄的功能叶，重复步骤三和步骤四3次，然后取病情指数的平均值作为病情指数。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤四中，所述的辣椒离体叶片抗病性鉴定分级标准为：

0级：叶片未发病；

1级：0＜病斑直径≤0.50cm；

3级：0.50cm＜病斑直径≤0.75cm；

5级：0.75cm＜病斑直径≤1.0cm；

7级：1.0cm＜病斑直径。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤四中，所述的病情指数＝∑(各级病害指数叶片数×该病害级别值)÷(调查总叶片数×最高级值)×100；

所述的最高级值指的是7级的级值7。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤五中，所述的单株抗病性分级标准为：

病情指数＜15.0为抗病品系；

病情指数在15.0～45.0为耐病品系；

病情指数＞45.0为感病品系。