[发明专利]逆转录病毒的生产方法在审
| 申请号： | 201910003911.2 | 申请日： | 2019-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN109735507A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 范洁;苏财忠;童涌 | 申请（专利权）人： | 苏州药明康德检测检验有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 郑权 |
| 地址： | 215104 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒 血清 培养基 收获 低浓度血清 逆转录病毒 病毒培养 细胞 鼠源 感染 沉淀 细胞培养 培养基更换 病毒原液 低速离心 高速离心 培养周期 宿主细胞 细胞冻存 病毒液 持续性 培养瓶 分装 重悬 递减 耗时 复苏 生产 补充 | ||
1.一种逆转录病毒生产方法，其特征在于，包括步骤：
(1)采用鼠源细胞培养病毒，鼠源细胞的培养基的血清浓度有个递减的过程；
(2)培养早期用较高浓度的血清，待细胞生长好后，逐步用含较低浓度血清的培养基更换含较高浓度血清的培养基，至少更换两次，待血清浓度低至2％时，每天收获病毒培养上清；
(3)收获的培养上清经低速离心后收集上清，再采用高速离心获得病毒沉淀；重悬病毒沉淀，分装获得高浓度的病毒。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：步骤(4)病毒培养第一代结束后，不经细胞冻存复苏，将感染了病毒的鼠源细胞与未经病毒感染的细胞混合，并传至新的培养瓶中，采用与步骤(1)～(2)相同的培养方法开始下一代的病毒生产。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述鼠源细胞为Mus dunni细胞。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，培养基更换次数可以为2次、3次或更多次。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，培养基的血清浓度有个递减的过程，改变培养基中血清的浓度为2次，分别是在病毒培养以及病毒传代后的第二天、第五天更换。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，每天收获病毒培养上清之后，补充含低浓度血清的培养基。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，病毒离心的条件。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低速离心的转速为1000-3000rpm/min。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低速离心的时间为15-25min。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高速离心的转速为的15500-20000rpm/min。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高速离心的时间为2-3小时。
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