[发明专利]逆转录病毒的生产方法

说明书

本发明公开一种逆转录病毒生产方法，是采用鼠源细胞培养病毒，鼠源细胞的培养基的血清浓度在培养期间通过逐步递减，用含较低浓度血清的培养基更换逐步更换高浓度血清的培养基；每天收获病毒培养上清，并每天补充低浓度血清的培养基；收获的培养上清经低速离心后，直接采用高速离心获得病毒沉淀，重悬病毒沉淀，分装获得高浓度的病毒。本发明的方法，收获的病毒原液中宿主细胞成分含量低，血清成分含量低，且病毒培养的第一代结束后，将感染了病毒的细胞与未感染病毒的细胞混合，并传至新的培养瓶中，进行持续性的感染培养，不经细胞冻存复苏，培养周期快，每代可连续收获多次血清浓度低的病毒液，耗时短。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种病毒的生产方法。

背景技术

为确保动物来源产品的安全性，国家相关法规要求需对产品的纯化生产工艺进行病毒清除灭活验证，通过加入模型病毒证明工艺可以清除或灭活一定对数值的病毒，即在病毒清除、灭活步骤将病毒掺入到样本中进行灭活，再用指示细胞检测具感染性病毒的变化值，或其他检测手段检测样品中病毒的残余量。(Points to Consider in theManufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use,1997),(Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to ProduceBiologicals,1993),(ICH Q5A(R1)

掺入到样本中的病毒需满足两个条件，一是病毒中杂质含量低，以排除在感染性测试中非病毒可能导致的干扰、毒性，二是具感染性的病毒滴度高(大于7.0log10)，以满足病毒清除灭活要求的病毒对数下降值。

模型病毒之一，逆转录病毒，为RNA包膜病毒，生产常用的细胞为Mus dunni细胞和mink lung细胞(M R Lander,S K Chattopadhyay.A Mus dunni cell line that lackssequences closely related to endogenous murine leukemia viruses and can beinfected by ectropic,amphotropic,xenotropic,and mink cell focus-formingviruses.J Virol.1984November；52(2):695–698.)。也有报道使用CHO细胞(Rong Ma,Ming-Gang Bi,Xiao-Lan Cui.Growth curve of murine xenotropic leukemia virus-related virus grown in Chinese hamster ovary cells.Journal of the ChineseMedical Association.2014January；77(1):44-48.)，(一种病毒原液的制备方法(申请号：CN201810584021))。用CHO细胞生产逆转录病毒，病毒导致细胞病变，导致病毒收获液中宿主细胞成分、及血清蛋白高，增加病毒浓缩纯化难度，病毒液中复杂的成分将对病毒清除验证中造成干扰。采用mink lung细胞、Mus dunni细胞，目前尚未建立持续性感染培养体系，难以持续获得大量病毒液，满足工业化的病毒清除验证对病毒的需求量。