[发明专利]具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽及其活性优化修饰物

权利要求书

1.具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽，其特征在于，抗菌肽是具有选择性抑制铜绿假单胞菌活性的人源天然蛋白，所述抗菌肽的氨基酸序列由12-22个氨基酸残基组成，其氨基酸序列为：SEQ ID NO.1；

SEQ ID NO.1:GRHGSGLGHSSSHGQHGSGSGR。

2.根据权利要求1所述的具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽，其特征在于，所述抗菌肽从人体足跟角质层脚屑中提取、分离、纯化得到。

3.根据权利要求2所述的具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽，其特征在于，所述提取的过程为：

收集人体足跟角质层脚屑，采用酸性乙酰乙酸缓冲液提取总蛋白；

所述分离、纯化的过程为：

提取的总蛋白经超滤管以三羟甲基氨基甲烷柠檬酸盐缓冲液膜渗滤后,用肝素琼脂糖凝胶柱进行亲和层析；

附着肝素的蛋白先通过含氯化钠的三羟甲基氨基甲烷柠檬酸盐缓冲液洗脱，再用三氟乙酸进行膜渗滤；

渗出液通过制备柱以反向高效液相色谱方式进行分离纯化,富集的蛋白经冷冻干燥后溶解于乙酸水溶液中保存；

富集的蛋白通过制备柱以反向高效液相色谱方式进行再一次分离纯化,分别收集各个峰值区的蛋白并用质谱仪进行分子量鉴定和氮末端蛋白测序。

4.根据权利要求1所述的具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽，其特征在于，抗菌肽SEQ NO.1对铜绿假单胞菌的最小杀菌浓度MBC90达到0.038μg/ml。

5.根据权利要求1所述的具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽，其特征在于，抗菌肽SEQ NO.1对铜绿假单胞菌的杀菌效果依赖于酸性环境。

6.具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽的活性优化修饰物，其特征在于，根据选择性抑制铜绿假单胞菌活性的灭菌肽SEQ ID NO.1多肽合成得到；包括：氨基酸序列：SEQID NO.2-6；

SEQ ID NO.1:GRHGSGLGHSSSHGQHGSGSGR，

SEQ ID NO.2:GHHGGGGGHGGGHGGHGGGGGH，

SEQ ID NO.3:RGSGSGHQGHSSSHGLGSGHRG，

SEQ ID NO.4：SLSSGHGSGHGHQRGGHRSGSG，

SEQ ID NO.5：GRHGSGLGHSSSHGQH，

SEQ ID NO.6：HAHSGHGQSTQR。

7.根据权利要求6所述的具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽的活性优化修饰物，其特征在于，SEQ NO.2、SEQ NO.3和SEQ NO.4的杀菌效果相比SEQ ID NO.1的杀菌效果强，最小杀菌浓度MBC90都小于0.019μg/mL。

8.根据权利要求6所述的具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽的活性优化修饰物，其特征在于，SEQ NO.5的最小杀菌浓度MBC90达到0.3μg/mL。

9.根据权利要求6所述的具有选择性抗铜绿假单胞菌活性的灭菌肽的活性优化修饰物，其特征在于，SEQ NO.6的最小杀菌浓度MBC90达到0.15μg/mL。