[发明专利]活减毒流感B病毒组合物及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种活减毒流感病毒(LAIV)B“LAIVB”)，其包含NS1(非结构蛋白1)编码区域中的缺失，LAVIB/DelNS1以及选自由PA(T210C)、NA T(1424C)、NP(C182T)和M(A281G)组成的组中的一个或多个突变(AM/LAVIB/DelNS1)。

2.根据权利要求1所述的减毒病毒，其中所述病毒不能在干扰素感受态细胞中复制。

3.根据权利要求2所述的病毒，其中所述干扰素感受态细胞是A549细胞。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的病毒，其中当与所述病毒在MDCK细胞中于33℃的复制相比时，所述病毒在MDCK细胞中于37℃复制较差。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的病毒，其中所述病毒能够在疫苗产生系统中以与相同株的野生型流感病毒相当的水平复制，任选地，其中在病毒产生系统中传代以后，从上清液回收10⁷pfu/ml至10⁸pfu/ml之间的AM/LAVIB/DelNS1。

6.根据权利要求6所述的病毒，其中所述疫苗产生系统包含MDCK细胞培养物。

7.根据权利要求1-6任一项所述的病毒，其中将所述病毒给药至有需要的受试者降低了感染流感B病毒的不同株的所述受试者中不同株流感B病毒的病毒滴度。

8.制备具有病毒毒力元件NS1蛋白的缺失(DelNS1)和适应性突变的LAIVB的方法，所述适应性突变允许突变的株在如卵和MDCK细胞的疫苗产生系统中生长，所述方法包括(a)通过将所述DelNS1流感B病毒转染到一种或多种疫苗产生细胞中来生成具有所述NS1编码区域的编码区域缺失的流感B病毒(b)拯救LAVIB/DelNS1以及(c)将拯救的病毒传代培养到一种或多种疫苗产生细胞中直到病毒滴度稳定，以获得AM/LAVIB/DelNS1。

9.根据权利要求8所述的方法，其中将LAIVB/DelNS1的基因组转染到293T/MDCK细胞混合物中。

10.根据权利要求9所述的方法，进一步包括将拯救的病毒在MDCK细胞中进行传代直到病毒滴度稳定，其中稳定的病毒滴度是根据在MDCK细胞或鸡胚卵中至少三次连续传代保持不变的病毒滴度来测量的。

11.根据权利要求8-10中任一项所述的方法，其中所述流感B病毒是B/Yamagata或B/Victoria株。

12.根据权利要求11所述的方法，其中步骤(b)之后的所述突变是PA(T210C)、NA T(1424C)、NP(C182T)和M(A281G)突变。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述病毒是Victoria株。

14.一种根据权利要求8-13所述的方法制备的LAIVB减毒病毒。

15.一种药物组合物，其包含有效量的病毒以诱导对由病毒基因组编码的抗原的免疫应答，在将DelNS1流感B病毒转染到一种或多种疫苗产生细胞且将拯救的病毒传代培养到一种或多种疫苗产生细胞中直到病毒滴度稳定以后，所述病毒基因组包含NS1蛋白编码区域中的缺失和一种或多种突变。

16.一种药物组合物，其包含有效量的病毒以诱导对由病毒基因组编码的抗原的免疫应答，所述病毒基因组包含NS1蛋白编码区域中的缺失以及PA(T210C)、NA T(1424C)、NP(C182T)和M(A281G)突变。

17.根据权利要求15或16所述的组合物，进一步包含佐剂。