[发明专利]生物聚合物分析方法及生物聚合物分析装置

说明书

在毛细管电泳时，有时会发生由杂质等产生尖峰状的噪声、或者检测到光谱不同于标识荧光体的波长光谱的噪声峰的现象。因此，本公开提供一种确定标识荧光体自身的强度而不受杂质所产生的噪声荧光峰影响的技术。本公开中，设定噪声峰共有的荧光强度特性(噪声的荧光谱线)，将噪声峰作为不同于标识荧光体的荧光体对待，利用标识荧光体+噪声荧光体来进行色彩变换，从而将荧光体与噪声进行分离(参照图5)。

技术领域

本公开关于生物聚合物分析方法和生物聚合物分析装置。

背景技术

作为以荧光体为标识来决定DNA的碱基序列的方法，例如有公知的桑格尔双脱氧法。在该双脱氧法中，首先，将要解析的DNA导入载体并放大，使其变性而生成单链模板DNA。然后，使该模板DNA与引物DNA耦合，以引物DNA为起点进行互补链合成。此时，除了4种单脱氧核苷酸之外，还添加特定的1种双脱氧核苷酸作为终止子。在添入了该双脱氧核苷酸时，互补链合成将停止，因此可以得到终止于特定碱基的各种长度的DNA片段。使用针对腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)这4种碱基的双脱氧核苷酸即ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP,分别进行上述互补链合成反应，得到终端碱基分别为A、C、G、T的各种长度的DNA片段，并对这些DNA片段进行分子量分离，按照分子量依次读取碱基类型，从而能够解析碱基序列。

分子量分离通过使用聚丙烯酰胺凝胶等的电泳来进行。近年来，在毛细管内填充凝胶或者分子量可分离的高聚物来进行电泳的方式成为主流。使用该毛细管电泳法的DNA碱基序列决定装置(DNA测序仪)能够应对连续自动分析，能够高速地对多个试样并行地进行分析处理，是目前普及最广泛的DNA测序仪。

对检测出的片段的碱基类型的判定原理是预先用终端碱基类型互不相同的4种荧光体对上述片段进行标识，在特定的检测位置照射激励光，根据所产生的荧光光谱的差异来判别碱基类型。基于上述原理的装置除了作为DNA测序仪的用途以外，还被广泛应用于荧光标识的生物相关物质的分析。

被用作为标识的荧光体的组合有多种，在选定蓝色系、绿色系、黄色系、红色系等不同特性的荧光体例如4种荧光体的情况下，荧光的极大波长分别为528nm、549nm、575nm、602nm这样互不相同的波长，根据该荧光极大波长的差异或荧光光谱的差异，能够识别荧光体类型或识别荧光体类型的混合状态，从而能够判定终端碱基类型。根据检测出的荧光光谱来确定荧光体类型的方法使用的是例如专利文献1记载的公知方法。

用作为标识的荧光体类型在决定碱基序列时通常为4种，但有时也使用5种以上的荧光体类型用于测定，且对每一个片段类型使用不同的荧光体进行标识，由此来测量DNA的分子量分离模式。在5种以上的情况下，也能够根据来自检测出的荧光体的荧光光谱等识别出荧光体类型，并判别片段类型及其长度。

测定装置至少具有测定荧光体类型数量以上的不同波段的荧光强度的功能。荧光体的荧光光谱互不相同，且每一种荧光体类型的基于光谱特性在多个波段中的荧光强度比率也不同。因此，根据检测出的多个波段的荧光强度和每一种荧光体类型的荧光强度比率，通过矩阵计算对每一种荧光体类型的强度(量)进行变换。由于荧光体类型的量就是碱基类型的量，因此，能够确定每一种碱基的量，并能得到每一种碱基随着泳动而发生的时间变化。