[发明专利]用于体外筛选活性化合物的试剂盒，方法以及试剂盒的用途

说明书

本发明涉及试剂盒，其包含共培养微装置，所述共培养装置含有在适用于这两种细胞种类的细胞培养中的周围感觉神经元(PSN)和人表皮角质细胞(HEK)。本发明也描述了使用根据本发明的试剂盒筛选活性化合物的方法，及其在体外药物测试中以及在生产用于各种皮肤病学应用(如特应性皮炎，敏感肌肤，光老化，伤口愈合和衰老皮肤中的表皮厚度)的美容产品中的用途。

发明领域

本发明涉及试剂盒，其包含共培养微装置，所述共培养装置含有在适用于这两种细胞种类的细胞培养中的周围感觉神经元(PSN)和人表皮角质细胞(HEK)。本发明也描述了使用根据本发明的试剂盒体外筛选活性化合物的方法，及其在体外药物测试中以及在生产用于各种皮肤病学应用(如特应性皮炎，敏感肌肤，光老化，伤口愈合和衰老皮肤中的表皮厚度)的美容产品中的用途。

背景技术

角质细胞与周围感觉神经元(PSN)在发育期间和在成熟的皮肤内具有广泛的相互作用。比如，角质细胞释放诱导游离神经末梢进行树状分枝和神经突朝向皮肤表面向外生长的神经营养因子(AlbersDavis，The skin as a neurotrophicorgan.Neuroscientist.2007；13:371–82)。它们也释放参与响应组织损伤和超敏反应，以及通过阳离子通道的TRP家族的受体响应冷和热的炎症介质(Chung等.，TRPV3 and TRPV4mediate warmth-evoked currents in primary mouse keratinocytes.J BiolChem.2004；279:21569–75)。

在另一方面，感觉神经末梢不仅仅转导感觉信号，而且还通过分泌控制血管形成和组织更新的促炎神经肽和炎症介质，在皮肤的新陈代谢和稳态中具有重要作用(Roosterman等.，Neuronal control of skin function:the skin as aneuroimmunoendocrine organ.Physiol Rev.2006；86:1309–79)。特别地，TRPV1阳性伤害感受器也调节皮肤寿命和新陈代谢，以及衰老后的免疫应答(Riera等，TRPV1 painreceptors regulate longevity and metabolism by neuropeptide signaling.Cell2014；157,1023–1036)。

由神经支配皮肤的感觉神经元产生的神经肽调节细胞增殖，伤口愈合，色素沉着和角质细胞固有免疫应答。已经知晓神经肽能够刺激由角质细胞产生的炎症介质，但关于角质细胞细胞表面受体的神经肽活化而最终导致那些介质上调的机制，信息仍然很少。

角质细胞和周围感觉神经元(PSN)之间的相互作用的发现，可帮助治疗和/或预防多种皮肤病学的病况和病症，比如，伤口愈合和皮肤衰老。在皮肤衰老期间，神经营养，增殖，分化，和神经炎的数量和速度的降低导致皮肤感觉和皮肤厚度的降低。因此，敏感性游离神经末梢的恢复应该重建皮肤神经感觉和表皮厚度，同时增加朝向表皮的营养机能，增加神经突生成，从而重建皮肤神经支配。

根据上述内容，本发明的目的是提供试剂盒形式的皮神经(neuroskin)，其包含共培养微装置，所述共培养微装置含有在合适的细胞培养基中的周围感觉神经元(PSN)和人表皮角质细胞(HEK)，所述细胞培养基允许评估在感觉游离末端和表皮角质细胞之间的相互作用。这样的试剂盒旨在研究感觉游离末端和表皮角质细胞相互作用的生物学和药理学，并筛选用于美容产业的感兴趣的潜在新药。

发明内容

本发明公开了一种新颖和有效的试剂盒，其包含共培养微装置，周围感觉神经元(PSN)，人表皮角质细胞和合适的细胞培养基，所述试剂盒模拟在人皮肤中在游离神经末梢和表皮角质细胞之间的连接。

这样的皮神经有利地用于体外筛选活性化合物的方法中，所述方法包括以下步骤：(a)提供根据本发明的试剂盒和测试化合物，和(b)将所述测试化合物与试剂盒接触并测量外周感觉功能，其中，测量所述功能由测量至少一种神经元标记的活性组成。