[发明专利]用于体外筛选活性化合物的试剂盒，方法以及试剂盒的用途

权利要求书

1.试剂盒，其包含(i)共培养微装置，(ii)周围感觉神经元(PSN)，(iii)人表皮角质细胞(HEK)，和(iv)细胞培养基。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述周围感觉神经元(PSN)来源自人诱导多能性干细胞(hiPSC)。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，所述周围感觉神经元(PSN)被诱导以在神经元的成熟期间自发地形成神经球。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的试剂盒，其中，所述细胞培养基为3N培养基，所述3N培养基包含含有N2的培养基与含有B27的培养基的1:1混合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述含有N2的培养基包括补充了N2补充剂，胰岛素，L-谷氨酰胺，非必需氨基酸(NEAA)，β-巯基乙醇，青霉素和链霉素的DMEM/F12。

6.根据权利要求4～5中任一项所述的试剂盒，其中，所述含有B27的培养基包括补充了B27补充剂，L-谷氨酰胺，青霉素和链霉素的神经基础培养基。

7.根据权利要求4～6中任一项所述的试剂盒，其中，所述细胞培养基补充有TGFβ和BMP信号传导抑制剂以生产神经诱导培养基。

8.根据权利要求4～7中任一项所述的试剂盒，其中，所述细胞培养基在两种细胞种类之间具有培养基梯度。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的试剂盒，其中，所述共培养微装置为含有微通道的微流体装置。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的试剂盒，其中，所述周围感觉神经元(PSN)在共培养微装置的微通道内水平地生长。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的试剂盒，其中，所述共培养微装置为用生物相容性硅氧烷制作并包含四至二十个独立腔室的用于细胞培养的微芯片，其中，所述周围感觉神经元(PSN)和人表皮角质细胞(HEK)交替地铺板在所述独立腔室的每一侧。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的试剂盒，其中，所述共培养微装置包括洞，人表皮角质细胞(HEK)铺板在所述洞中。

13.根据权利要求1～12中任一项所述的试剂盒，其中，所述共培养微装置覆盖有基质胶，或层粘连蛋白，或聚鸟氨酸，或胶原蛋白，以产生对于每一种细胞类型适当的微环境，并防止人细胞迁移到其他隔室。

14.根据权利要求1～13中任一项所述的试剂盒，其中，周围感觉神经元(PSN)与共培养的人表皮角质细胞(HEK)连接，模仿在人皮肤中在游离神经末梢和表皮角质细胞之间的连接。

15.用于体外筛选活性化合物的方法，包括：

(a)提供:

(i)如权利要求1～14中任一项所定义的试剂盒；

(ii)测试化合物；和

(b)将所述测试化合物与所述试剂盒接触并测量周围感觉神经元功能，其中，测量所述功能由测量至少一种神经元标记的活性组成。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述活性化合物作用于神经元生长，神经末梢数量，神经元活性，表皮再生等的调节。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述神经元活性的调节是通过人表皮角质细胞(HEK)诱导生长因子释放而介导的。

18.根据权利要求16所述的方法，其中，所述表皮再生是通过调节神经元释放因子来介导的。