[发明专利]肌酐脱亚氨酶及其用途

权利要求书

1.一种经分离的肌酐脱亚氨酶多肽，其包含根据SEQ ID NO：4的氨基酸序列或其至少80％序列同一性变体，其中所述经分离的肌酐脱亚氨酶多肽具有肌酐脱亚氨酶活性。

2.根据权利要求1所述的经分离的肌酐脱亚氨酶多肽，其中变体的序列保留以下一个或多于一个：

-SEQ ID NO：4的第364位氨基酸，

-SEQ ID NO：4的第371位氨基酸，

-SEQ ID NO：4的第394位氨基酸，和/或

-SEQ ID NO：4的第410至419位氨基酸残基中的一个或多于一个，优选全部。

3.根据权利要求1或2所述的经分离的肌酐脱亚氨酶多肽，其中所述经分离的肌酐脱亚氨酶多肽与Mn²⁺结合。

4.一种经分离的核酸，其编码根据权利要求1至3中任一项所述的肌酐脱亚氨酶多肽。

5.根据权利要求4所述的经分离的核酸，其还包含肌酐泰氏菌肌酐脱亚氨酶5′UTR。

6.根据权利要求4或5所述的经分离的核酸，其还包含肌酐泰氏菌肌酐脱亚氨酶3′UTR。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的经分离的核酸，其包含SEQ ID NO：3的至少第1至1374位核苷酸或其至少80％序列同一性变体，优选包含SEQ ID NO：3的第1至1594位核苷酸或其至少80％序列同一性变体。

8.一种载体，其包含根据权利要求4至7中任一项所述的核酸。

9.一种细胞，其包含根据权利要求4至7中任一项所述的核酸或根据权利要求8所述的载体，其中所述细胞不是肌酐泰氏菌细胞，并且优选是大肠杆菌细胞。

10.一种制备根据权利要求1至3中任一项所述的经分离的肌酐脱亚氨酶多肽的方法，其包括以下步骤：

(i)在根据权利要求9所述的细胞中表达根据权利要求4至7中任一项所述的核酸，和

(ii)分离肌酐脱亚氨酶多肽。

11.根据权利要求1至3中任一项所述的肌酐脱亚氨酶多肽在确定样品中肌酐含量中的用途。

12.一种确定样品中肌酐含量的方法，其包括以下步骤：

(a)使所述样品与根据权利要求1至3中任一项所述的肌酐脱亚氨酶多肽接触，以将所述样品中的肌酐转化为N-甲基乙内酰脲和NH₃/₄⁺，和

(b)对步骤(a)的转化进行定量。

13.根据权利要求12所述的方法，其中步骤(b)包括确定步骤(a)中产生的NH₃/₄⁺的含量，其中步骤(a)还包括使所述样品与NADPH或NADH、α-酮戊二酸和谷氨酸脱氢酶接触以将NH₃/₄⁺、α-酮戊二酸和NADPH或NADH分别转化为谷氨酸和NADP⁺或NAD⁺，并且步骤(b)包括分别对NADPH或NADH的消耗进行定量。

14.一种适合于根据权利要求12或13所述的方法确定样品中的肌酐含量的试剂盒，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的肌酐脱亚氨酶多肽、NADPH或NADH、α-酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶和任选的pH缓冲剂。

15.一种适合于确定样品中肌酐含量的传感器，其包含固定在所述传感器中或所述传感器上的根据权利要求1至3中任一项所述的肌酐脱亚氨酶多肽。