[发明专利]SPARC测定

说明书

本发明涉及一种用于检测富含半胱氨酸的酸性分泌性蛋白质组(SPARC)的测定，且更具体地涉及其在评估肺癌中的用途。

技术领域

本发明涉及一种用于检测富含半胱氨酸的酸性分泌性蛋白质组(SPARC)的测定，且更具体地涉及其在评估肺癌中的用途。

背景技术

富含半胱氨酸的酸性分泌性蛋白质组(SPARC)，也被称作骨连接蛋白或基底膜蛋白40(BM-40)，是一种32-kDa母体细胞蛋白，其调节细胞外基质(ECM)的组装和沉积、生长因子信号传导以及细胞与其周围ECM之间的相互作用[1,2]。SPARC的表达在胚胎发育过程中升高，而在正常成人组织中则降低。然而，其表达在具有高ECM转换的上皮/内皮细胞中、在与瘤形成相关的异常组织生长期间以及在组织损伤和炎症期间增加，从而突出显示SPARC在组织重塑中的重要性[3-5]。

SPARC已显示为以浓度依赖的方式抑制醇脱氢酶的热聚集而具有类似伴侣的活性[6]。此外，一些研究已表明SPARC在ECM中结合不同的胶原蛋白，并且对于正确的胶原蛋白沉积和组装很具重要性[7-13]。SPARC的分子伴侣活性受不同因素的调节。已显示，适度的细胞外Ca²⁺浓度对于SPARC与其ECM伴侣的结合是必需的。细胞外蛋白酶的存在是调节其胶原结合活性的另一个重要开关。研究已显示，不同的金属蛋白酶(MMP)可以在特定位点切割SPARC，这将对胶原蛋白的亲和力提高至20倍[14,15]。有趣的是，已显示SPARC增加成纤维细胞中MMP的表达，从而产生正反馈回路[16-18]。如果这种反馈机制变得不受控制，那么它可能参与胶原沉积增加的纤维化疾病的病理学。

纤维化是许多疾病(诸如癌症、高血压、肝硬化和纤维化性肺部疾病)中的病理学的一部分和/或终点。纤维化的特征在于包括胶原蛋白在内的ECM沉积增加，这会干扰正常的组织功能，从而导致器官衰竭。已知SPARC是纤维化的重要因素[19-23]。与SPARC无效的小鼠相比，博来霉素诱导的肺纤维化的野生型小鼠的肺内胶原蛋白含量增加，从而表明存在SPARC时发生的纤维化反应更高[19,20]。此外，已显示在纤维化和癌症中SPARC表达被上调[24-27]。

发明内容

本发明人现在已经开发出一种高度敏感的SPARC测定，其与患肺癌的患者高度相关。所述测定可以区分肺癌和其他纤维化疾病，并因此在肺癌中评估显示出极好的诊断效用。还发现所述测定在评估特发性肺纤维化(IPF)中具有广阔的应用前景。

因此，一种用于检测和/或监测患者的肺癌进展的免疫测定的方法，所述方法包括将患者生物流体样品与与N端氨基酸序列LLARDFEKNY(SEQ ID NO：1)特异性反应的单克隆抗体接触，其中所述单克隆抗体不特异性识别或结合所述N端氨基酸序列的N延伸的延长形式或所述N端氨基酸序列的N截短的短形式，确定所述单克隆抗体与包括所述N端氨基酸序列的肽之间的结合量，并将所述结合量与与正常健康受试者相关的值和/或与已知肺癌严重程度相关的值和/或在先前时间点从所述患者获得的值和/或预定临界值相关联。

如上所述，所述单克隆抗体不特异性识别或结合所述N端氨基酸序列的N延伸的延长形式或所述N端氨基酸序列的N截短的短形式。在这方面，“N端氨基酸序列的N延伸的延长形式”是指延伸超过序列H₂N-LLARDFEKNY(SEQ ID NO：1)的一个或多个氨基酸。例如，如果N端氨基酸序列H₂N-LLARDFEKNY(SEQ ID NO：1)被谷氨酸残基延长，那么对应的“N延伸的延长形式”将为H₂N-ELLARDFEKNY(SEQ ID NO：2)。类似地，“N端氨基酸序列的N截短的短形式”是指从序列H₂N-LLARDFEKNY(SEQ ID NO：1)的N末端去除的一个或多个氨基酸。例如，如果N端氨基酸序列H₂N-LLARDFEKNY(SEQ ID NO：1)缩短了一个氨基酸残基，那么对应的“N截短的短形式”将为H₂N-LARDFEKNY(SEQ ID NO：3)。