[发明专利]用于改善CAR-T细胞功能的组合物及其用途

说明书

本发明涉及包含CAR‑T细胞和GSK3β抑制剂的组合物和试剂盒，包括此类组合物和/或试剂盒在治疗诸如癌症等的疾病中的使用。

相关申请的交叉引用

本发明要求2017年11月20日提交的美国临时申请US62/588,519的优先权，出于所有目的，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本文公开的内容涉及用于改善表达受体蛋白的基因修饰的或嵌合的抗原受体T细胞(例如，CAR-T)的功能的组合物和方法，所述组合物和方法可用于多种治疗应用，例如肿瘤的治疗。

背景技术

利用表达嵌合抗原受体的工程化T细胞(CAR-T)作为针对恶性肿瘤的免疫治疗策略已成为成功治疗外周液体肿瘤的标志。但是，CAR-T疗法在实体肿瘤治疗中显示出混合反应。过继性T细胞疗法的成功取决于治疗性T细胞容易获得抗原源和协同刺激信号，这会产生强大的活化模式和强烈的细胞毒性作用，例如在血液肿瘤中或在治疗高度免疫原性肿瘤(例如黑色素瘤)的过程中，CAR-T细胞暴露于淋巴结中大量的恶性B细胞。相反，在实体肿瘤的CAR-T治疗期间，由于有限地暴露于肿瘤抗原而导致T细胞弱活化，进而导致免疫反应不稳定、克隆扩增贫血和克隆提早收缩。

本领域采用了各种方法来克服克隆收缩和弱T细胞活化这一问题，并在一定程度上取得了成功。例如，将CD28信号传导分子附加到CAR构建体的细胞内部分以设计所谓的第二代CAR-T细胞，以克服克隆收缩、促进快速增殖和克服细胞因子缺乏。随着时间的流逝，人们观察到这种修饰并没有克服将CAR-T用于实体肿瘤的所有障碍。人们已对CAR-T细胞进行了进一步修饰以创建添加有诸如41BB和/或OX40的协同刺激分子的“第三代”CAR。另外，患者通常接受IL2治疗，以保持转移的T细胞的存活和功能，这导致治疗性T细胞不受控制地产生细胞因子。

尽管这些方法在实体肿瘤的治疗中已经能够在一定程度上增强T细胞的活化，但是仍然需要进一步创新来完全克服克隆收缩并促进T细胞的快速增殖和活化。本文提供了这样的方法。

发明内容

本文公开的内容涉及用于改善CAR-T疗法的组合物和方法。本领域已认识到阻碍CAR-T细胞免疫疗法在实体肿瘤中成功的一个主要障碍是弱抗原暴露，导致CAR-T细胞活化不足，从而伴随产生弱的抗肿瘤免疫反应，本发明提供了克服CAR-T疗法中现有障碍的组合物和方法。具体而言，本文所述的组合物和方法克服了第二代CAR中CD28和其它协同刺激信号部分的许多限制，以及与补充IL2疗法相关的细胞毒性。

在各种实施方式中，本文提供一种用于体外扩增T细胞群的方法，包括使T细胞群与GSK3β抑制剂接触。在各种实施方式中，首先用编码嵌合抗原T细胞受体的核酸转导T细胞。在各种实施方式中，T细胞来源于哺乳动物。在各种实施方式中，哺乳动物是人。

在各种实施方式中，该方法进一步包括使转导的细胞与肿瘤抗原接触。

在各种实施方式中，本文提供一种用于体外扩增T细胞群的方法，包括：从受试者体内分离出包含所述T细胞的样品；使用编码嵌合抗原受体蛋白的核酸转导所述T细胞群，所述嵌合抗原受体蛋白包含与肿瘤抗原结合的分子；以及，使转导的T细胞与GSK3β抑制剂接触。

在各种实施方式中，该方法进一步包括使转导的T细胞与肿瘤抗原接触。在各种实施方式中，T细胞同时与GSK3β抑制剂和肿瘤抗原接触。

在各种实施方式中，用编码包含白介素13或其变体或其片段的嵌合抗原受体蛋白的核酸转导T细胞(IL13 CAR-T)。在各种实施方式中，核酸编码白介素13变体IL13.E13K.R109K或其片段。