[发明专利]SO3色谱在病毒纯化方法中的应用在审

专利信息
申请号: 201880084877.X 申请日: 2018-11-08
公开(公告)号: CN111527202A 公开(公告)日: 2020-08-11
发明(设计)人: M·沃尔舍克;M·赖特;A·斯特兰卡尔;M·T·斯巴伊泽罗 申请(专利权)人: 蓝天疫苗有限责任公司;比亚分离公司
主分类号: C12N7/02 分类号: C12N7/02
代理公司: 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 代理人: 黄琳娟
地址: 奥地利*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: so3 色谱 病毒 纯化 方法 中的 应用
【说明书】:

发明涉及从细胞培养物中纯化病毒颗粒的工艺,其包括步骤为:将细胞培养物离心,以获得含有病毒颗粒的上清液部分,用核酸酶孵育所述部分,用低电导率缓冲液稀释所述部分,将所述被稀释的部分进行SO3色谱步骤,用低电导率缓冲液执行洗涤步骤,以及洗脱流感病毒颗粒。

技术领域

本发明涉及从细胞培养物中纯化病毒颗粒,特别地涉及纯化流感病毒颗粒的工艺,该工艺包括的步骤为:将细胞培养物离心,以获得含有病毒颗粒的上清液部分,用核酸酶孵育所述部分,用低电导率缓冲液稀释所述部分,将所述被稀释的部分进行SO3色谱步骤,用低电导率缓冲液执行洗涤步骤,以及洗脱流感病毒颗粒。

背景技术

通过在细胞系(例如Vero细胞)上培养获得的病毒获取物,不仅包含所需的病毒,而且还包含源自培养细胞的蛋白质和DNA。但是,当计划将病毒用于某些用途(例如疫苗生产)时,它们的尽可能纯净是至关重要的。

流感是一种传染性的病毒性疾病,每年约6亿人感染,导致500,000人死亡。该病的病原体来自正粘病毒科的包膜病毒,正粘病毒科分为三个属,A型流感病毒、B型流感病毒和C型流感病毒。对疫苗需求和流行病威胁的增加,以及传统的蛋源性疫苗(egg basedvaccine)的其他一些弊端,刺激了新生产策略的开发和引入。通常地,来自尿囊液的流感病毒的下游工艺由通过离心的澄清、通过超滤的浓缩和通过超离心的纯化组成。在1960年代和1970年代,报道了在磷酸钙和琼脂糖凝胶柱上进行流感病毒小规模色谱纯化的早期尝试。随着基于细胞培养工艺的引入,目前正在评估使用现代色谱支持物的纯化方法。Nayak等人使用深度过滤、灭活、超滤和凝胶过滤的组合来纯化源自MDCK细胞的流感病毒(NayakDP.et al.,J.Chromatogr.B Analyt Technol Biomed Life Sci,2005;823:75-81)。尺寸排阻色谱也与阴离子交换色谱结合使用,用于纯化A型流感病毒(Kalbfuss B.et al.,Biotech Bioeng.2007;96:932-44)。具有传质增强的色谱支持物(例如膜吸附器和整体柱)已被证明更为有效,并且用于纯化不同的病毒(Kramberger P.et al.,J.Chromatogr.A2007;1144:143-9;Vicente T.et al.,J.Memb.Sci.,2008;311:270-83)。Kalbfuss等人比较了强的和弱的阴离子交换膜吸附器用于纯化A型流感病毒,并实现了高达80%的高病毒回收率(Kalbfuss B.et al.,J.Memb:Sci.2007;299:251-60)。还研究了基于膜吸附器和整体柱的亲和色谱和伪亲和色谱纯化流感病毒(Opitz L.et al.,Vaccine 2007;25:939-47;Kalashnikova N.et al.,Anal Chem 2008;80:2188-98;Opitz L.et al.,BiotechnolBioeng 2009;103:1144-54)。所有描述的方法都用于纯化灭活的流感病毒,而研究者并未专注于保留病毒的传染性。

Ye GJ等人报告了将benzonase处理、澄清和柱色谱用于清除单纯疱疹病毒的应用(2015,URL:https:jjwww.agtc.comjuploadsjdocumentsJAGTC_Doc_5414_ASGCT_2015_Viral clearance_2015-04-2I.pdf)。

Zaveckas M等人报道了使用SO3整体柱色谱纯化猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组病毒样颗粒,其纯度约为40%。病毒回收率约为15%(J.Chromatogr.B:BiomedicalSciencesApplications,Elsevier,Amsterdam.vol.991,2015,pages 21-28)。

Strauss D等人描述了将阴离子交换色谱用于去除病毒的应用(Biotechnol.Bioengineering,vol.102,no.I,2009,pages 168-175)。

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