[发明专利]SO3色谱在病毒纯化方法中的应用

权利要求书

1.一种从细胞培养物中纯化病毒颗粒的工艺，其包括所示顺序的步骤：

a)将细胞培养物离心，以获得含有病毒颗粒的上清液部分，

b)用核酸酶孵育所述部分，

c)用低电导率缓冲液稀释所述部分，

d)将被稀释的部分进行SO3色谱步骤，

e)用低电导率洗涤缓冲液执行洗涤步骤，以及

f)洗脱病毒颗粒。

2.根据权利要求1所述的工艺，其中所述病毒是流感病毒。

3.根据权利要求1或2所述的工艺，其中病毒颗粒在洗脱后被稀释。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的工艺，其中在洗脱之后，执行超滤和/或无菌过滤。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的工艺，其中所述SO3色谱是柱色谱，特别地是甲基丙烯酸酯整体柱。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的工艺，其中所述稀释缓冲液的电导率为5mS/cm或更小，特别地为1mS或更小。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的工艺，其中所述洗涤缓冲液的电导率为12mS/cm或更小，特别地为7mS或更小。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的工艺，其中所述洗涤缓冲液进一步地包含一种或多种添加剂，特别地EDTA。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的工艺，其中所述缓冲液选自由Hepes、Tris、Tris碱、磷酸钾、磷酸钠、Mops、Bis-Tris丙烷甘氨酸、Mes和Bis-Tris组成的组。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的工艺，其中所述缓冲液进一步地包含蔗糖、山梨糖醇和/或甘露糖醇。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的工艺，其中以分步或线性梯度，特别地以氯化钠梯度，来洗脱病毒。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的工艺，其中所述病毒是流感病毒，特别地选自由A型流感病毒、B型流感病毒和C型流感病毒组成的组。

13.根据权利要求12所述的工艺，其中所述流感病毒选自由流感病毒野生型和包含修饰的流感病毒组成的组，所述修饰包括取代突变、插入和/或缺失。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的工艺，其中离心速度为至少2,000g，特别地为至少3,000g，特别地为至少4,000g，特别地为至少4,100g。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的工艺，其中细胞的培养是用宿主细胞执行的，特别地是用Vero细胞。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的工艺，其中至少50％，特别地至少60％，特别地至少70％，特别地至少80％，特别地至少85％，特别地至少90％，特别地至少95％，更特别地至少99％的宿主细胞蛋白被去除。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的工艺，其中至少50％，特别地至少60％，特别地至少70％，特别地至少80％，特别地至少85％，特别地至少90％，特别地至少95％，更特别地至少99％的宿主细胞DNA被去除。