[发明专利]一种制备功能性肝前体细胞或肝细胞或者功能性小肠上皮前体细胞或小肠上皮细胞的方法

说明书

本发明提供一种功能性肝(前体)细胞或功能性小肠上皮(前体)细胞的制备方法，其包括在抗生素存在下培养包含肝(前体)细胞或者小肠上皮(前体)细胞的分离细胞群的步骤。另外，本发明还提供一种包含功能性肝前体细胞的实质上均匀的分离细胞群，其中，CYP3A4在所述功能性肝前体细胞中的表达水平与其在HepaRG(注册商标)细胞株中的表达水平相比至少增大5倍。

技术领域

本发明涉及一种制备功能性肝前体细胞或肝细胞或者功能性小肠上皮前体细胞或小肠上皮细胞的方法、以及由该方法得到的功能性肝前体细胞或肝细胞或者功能性小肠上皮前体细胞或小肠上皮细胞，以及使用它们的再生医疗或药物的毒性评价。

背景技术

作为肝硬化等肝病的根治疗法，一直以来都在进行肝移植，目前肝移植也仍然是主流的治疗方法。然而，为了使肝移植作为常用医疗普及却存在诸如器官捐献者不足、费用高昂、组织相容性等诸多问题。因此，建立使用肝细胞或肝前体细胞的肝再生医疗方法成为当务之急。

另外，在制药研究领域，药剂的毒性试验中多使用实验动物。然而，可能由于人与动物的物种差异而导致体内的药代动力学不同，在使用实验动物的试验中不能充分评价药物的安全性，导致在临床试验阶段才报道肝毒性，进而导致药剂开发中止的情况屡见不鲜。因此，非常期待建立一种使用人肝细胞的体外药物毒性评价系统，以用于在制药研究的初期阶段预测人体内的药代动力学。

迄今为止已经建立了多个人肝细胞株，但其中大部分的药物代谢活性非常低，不具有充分的肝功能。HepaRG(注册商标)细胞(非专利文献1)能维持肝功能，但它来自肝癌，具有致瘤性，因此不适合用于肝再生医疗。另外，由于它是来自一个特定个体的细胞株，因此无法针对药物代谢及毒性的个体差异进行评价。另一方面，作为人原代培养肝细胞的稳定供应极为困难，其原因在于，原本作为原料的人肝脏的获取受限，加之传代培养会导致药物代谢活性丧失，并且仅能够在极短时间内维持肝功能。此外，还存在批次间差异非常大的问题。

因此，近年来，从ES细胞或iPS细胞分化诱导功能性肝细胞的方式备受关注，至今为止也报道了多种分化诱导方法(非专利文献2、非专利文献3)。然而，目前所报道的分化诱导方法均分化效率低，无法高收率且高重现性地制备具有充分肝功能的肝细胞。因此，仍然需要一种能够高效且稳定地制备具有充分药物代谢能力的肝细胞的方法、以及通过这种方法得到的功能性肝细胞。

另外，小肠上皮细胞也与肝细胞同样地表达药物转运蛋白及药物代谢酶，并对药物代谢起到重要作用。特别是，为了预测口服制剂的生物利用度并评价安全性，需要使用功能性小肠上皮细胞。然而，目前尚未建立一种能够高效且稳定地制备具有充分药物代谢能力的小肠上皮细胞的方法、以及通过这种方法得到的功能性小肠上皮细胞。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Aninat,C.et al.,Drug Metab.Dispos.,2006；34(1):75-83

非专利文献2：Soudais,C.et al.,Development,1995；121(11):3877-88

非专利文献3：Abe,K.et al.,Exp Cell Res.,1996；229(1):27-34

发明内容

发明想要解决的课题

本发明的目的在于，克服现有技术的诸多问题，提供一种高效且稳定地制备具有充分药物代谢能力的功能性肝前体细胞或肝细胞或者功能性小肠上皮前体细胞或小肠上皮细胞的方法。

用于解决课题的手段

本发明人等经过潜心研究发现：通过在抗生素存在下培养包含肝(前体)细胞或小肠上皮(前体)细胞的细胞群，能够制备具有充分药物代谢能力的肝(前体)细胞或小肠上皮(前体)细胞。