[发明专利]一种制备功能性肝前体细胞或肝细胞或者功能性小肠上皮前体细胞或小肠上皮细胞的方法

权利要求书

1.一种制备功能性肝前体细胞或功能性肝细胞或者功能性小肠上皮前体细胞或功能性小肠上皮细胞的方法，其包括如下培养步骤：在抗生素存在下培养包含肝前体细胞或肝细胞或者小肠上皮前体细胞或小肠上皮细胞的分离细胞群。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述分离细胞群是来自肝组织或小肠上皮组织的原代培养物。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述分离细胞群是从干细胞分化诱导而成的。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述干细胞是胚胎干细胞(ES细胞)。

5.如权利要求3所述的方法，其中，所述干细胞是人工多能性干细胞(iPS细胞)。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述iPS细胞来自健康个体。

7.如权利要求5所述的方法，其中，所述iPS细胞来自药物性肝损害患者或药物性小肠损害患者。

8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，所述抗生素选自由嘌呤霉素、杀稻瘟菌素S、G418、潮霉素、腐草霉素以及腐草霉素D1所构成的组。

9.如权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，所述抗生素是0.1μg/ml～100μg/ml的嘌呤霉素。

10.如权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，所述培养步骤在肝分化诱导因子的存在下进行。

11.如权利要求10所述的方法，其中，所述肝分化诱导因子选自由细胞因子、细胞生长因子、ROCK抑制剂、MAPK抑制剂、ALK抑制剂以及细胞外基质所构成的组。

12.如权利要求1～11中任一项所述的方法，其还包括在氨的存在下培养所述分离细胞群的步骤。

13.一种功能性肝前体细胞或功能性肝细胞，其通过权利要求1～12中任一项所述的方法来获得。

14.一种功能性小肠上皮前体细胞或功能性小肠上皮细胞，其通过权利要求1～12中任一项所述的方法来获得。

15.一种包含功能性肝前体细胞的实质上均匀的分离细胞群，其中，CYP3A4在所述功能性肝前体细胞中的表达水平与其在HepaRG(注册商标)细胞株中的表达水平相比至少增大5倍。

16.如权利要求15所述的分离细胞群，其中，所述功能性肝前体细胞以高于所述HepaRG(注册商标)细胞株的水平来表达选自由甲胎蛋白、白蛋白、CYP1A2以及CYP2B6所构成的组中的至少一种。

17.如权利要求15或16所述的分离细胞群，其中，所述功能性肝前体细胞是CD44阳性和/或EpCAM阳性。

18.如权利要求15～17中任一项所述的分离细胞群，其中，所述分离细胞群被永生化。

19.一种功能性肝前体细胞，其以保藏编号BP-02591和/或BP-02592保藏于独立行政法人制品评价技术基盘机构专利微生物保藏中心。

20.一种治疗患有肝功能损害的对象的方法，其包括将权利要求15～18中任一项所述的分离细胞群给药于所述对象的步骤。

21.一种用于治疗肝功能损害的药物组合物，其包含权利要求15～18中任一项所述的分离细胞群而成。

22.一种供试化合物的毒性评价方法，其包括：

(1)使通过将权利要求15～18中任一项所述的分离细胞群或者权利要求19中所述的功能性肝前体细胞进行分化诱导而获得的功能性肝细胞与供试化合物进行接触的步骤；以及

(2)分析所述功能性肝细胞的损害的程度的步骤。