[发明专利]代谢工程

权利要求书

1.一种将宿主从其中宿主无法从2,3-氧化鲨烯(OS)进行皂皮酸(QA)生物合成的表型转化为其中宿主能够进行所述QA生物合成的表型的方法，

所述方法包括在将异源核酸引入所述宿主或其祖先的较早步骤之后，在所述宿主或其一种或多种细胞中表达所述异源核酸的步骤，

其中所述异源核酸包含多种核苷酸序列，所述多种核苷酸序列中的每一种编码一种多肽，所述多肽组合起来具有所述QA生物合成活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸编码以下多肽中的全部：

(i)β-香树脂醇合酶(bAS)，用于将OS环化为三萜烯；

(ii)能够在C-28位置处将β-香树脂醇或其氧化衍生物氧化为羧酸的酶(“C-28氧化酶”)；

(iii)能够在C-16α位置处将β-香树脂醇或其氧化衍生物氧化为醇的酶(“C-16α氧化酶”)；以及

(iv)能够在C-23位置处将β-香树脂醇或其氧化衍生物氧化为醛的酶(“C-23氧化酶”)，

其中所述多肽中的每一种任选地从皂皮树获得。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述C-28氧化酶、C-16α氧化酶和C-23氧化酶是所有的CYP450酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其中

(i)所述C-28氧化酶是CYP716；

(ii)所述C-16α氧化酶是CYP 716或CYP87；

(iii)所述C-23氧化酶是CYP714、CYP72或CYP 94。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述bAS、C-28氧化酶、C-16α氧化酶和C-23氧化酶多肽选自表1或表2中对应的多肽或任何所述多肽的基本上同源的变体或片段，所述变体或片段任选地如在表4中所定义；或由以下编码：表1或2中对应的多核苷酸或任何所述多核苷酸的基本上同源的变体或片段，所述变体或片段任选地如表4中所定义。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述多肽选自：

(i)SEQ ID:No 2中所示的β-香树脂醇合酶(bAS)；

(ii)SEQ ID:No 4或18中所示的或由SEQ ID NO:19-28中任一个编码的C-28氧化酶；

(iii)SEQ ID:No 6、10或12中所示的C-16α氧化酶；

(iv)ID:No 8、14或16中所示的C-23氧化酶；

或任何所述多肽的基本上同源的变体或片段。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述多肽选自：

(i)SEQ ID:No 2中所示的β-香树脂醇合酶(bAS)；

(ii)SEQ ID:No 4中所示的C-28氧化酶；

(iii)SEQ ID:No 6中所示的C-16α氧化酶；

(iv)SEQ ID:No 8中所示的C-23氧化酶

或任何所述多肽的基本上同源的变体或片段。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述核酸进一步编码以下多肽中的一种或多种：

(i)HMG-CoA还原酶(HMGR)；

(ii)鲨烯合酶(SQS)；

其中所述HMGR或SQS任选地选自表3中对应的多肽或任何所述多肽的基本上同源的变体或片段，或由表3中对应的多核苷酸或任何所述多核苷酸的基本上同源的变体或片段编码。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述核苷酸序列存在于两种或更多种不同的核酸分子上。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述核酸分子是通过共渗入多个根癌土壤杆菌菌株引入的，所述多个根癌土壤杆菌菌株的每一个携带所述核酸分子中的一种或多种。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述核酸分子是瞬时表达载体。