[发明专利]MHC多聚体的生产方法

权利要求书

1.用于生产MHC分子的方法，所述方法包括：

a.在降低的温度下提供MHC分子，所述MHC分子在所述MHC分子的肽结合槽中结合有模板肽，所述模板肽在升高的温度下与所述MHC分子解离，其中所述MHC分子优选是人白细胞抗原-A(HLA-A)分子；

b.将所述温度改变至升高的温度，由此使所述模板肽与所述MHC分子解离；和

c.在允许所需肽结合至所述MHC分子的肽结合槽的条件下，使所述MHC分子在所述升高的温度下与所述所需肽接触以结合至所述MHC分子的肽结合槽。

2.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述降低的温度是10℃或更低的温度和/或所述升高的温度是15℃或更高的温度，优选地，其中所述降低的温度是4℃或更低的温度，和/或其中所述升高的温度在20℃至40℃之间并且包括20℃和40℃。

3.前述权利要求中任一项所述的方法，其中，b)和c)同时进行。

4.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所需肽以超过结合有模板肽的所述MHC分子的量的过量提供，优选其中所述过量是至少约5倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、200倍的摩尔过量。

5.前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤a)中的所述MHC分子作为单体、作为包含至少两个MHC分子的复合物或作为多聚体提供。

6.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MHC分子是包含所述MHC分子和至少一个其他分子，优选至少一个其他蛋白质，优选至少一个其他MHC分子的复合物的一部分。

7.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MHC分子是人HLA-A分子，并且其中所述HLA-A分子优选选自HLA-A*02和HLA-A*02：01。

8.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述模板肽通过取代至少一个、两个或更多个锚定残基，优选一个或两个锚定残基而获得。

9.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述模板肽是包含以下的多肽：

a.如SEQ ID NO：1(IAKEPVHGV)、SEQ ID NO：2(IAKEPVHGA)或SEQ ID NO：3(FAPGNAPAL)中所示的多肽序列；或者

b.具有1、2、3或4个氨基酸取代、缺失或插入的如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ IDNO：3中所示的多肽序列。

10.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法针对结合至所述MHC分子的肽结合槽的不同所需肽并行地执行。

11.前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤a)中提供的所述MHC分子在所述降低的温度下产生并负载所述模板肽。

12.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述MHC分子的肽结合槽中结合有模板肽的MHC分子是通过在10度或更低的温度下在所述模板肽存在下将MHC分子重折叠而提供的。

13.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法是无细胞的。

14.前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括检测所述所需肽与所述MHC分子的结合，优选其中所述结合是通过检测与所述所需肽缔合的标记物来检测的，优选其中所述所需肽包含所述标记物。

15.前述权利要求中任一项所述的方法，用于在测试或参考化合物的存在下确定所述所需肽的结合。

16.可通过前述权利要求中任一项所述的方法获得的MHC分子。