[发明专利]用于使用外排体相关基因编辑来治疗癌症的方法和组合物

说明书

本文中提供了包含外排体的组合物，所述外排体在其表面上包含CD47并且还包含CRISPR系统。还提供了使用外排体进行基因编辑和通过基因编辑治疗癌症的方法。

相关申请的参考

本申请要求于2017年12月15日提交的美国临时申请号62/599,340的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。

背景技术

1.技术领域

本发明总体上涉及医学和肿瘤学领域。更特别地，其涉及外排体用于体内递送核酸酶复合物以进行基因编辑的用途。

2.相关技术描述

基因编辑是一种允许在活细胞内修饰靶基因的技术。最近，利用CRISPR的细菌免疫系统根据需求执行基因编辑，彻底改变了科学家进行基因组编辑的方式。CRISPR系统的Cas9蛋白是一种RNA指导的DNA内切核酸酶，可通过改变其指导RNA序列而相对容易地被工程化为靶向新位点。该发现使得序列特异性基因编辑功能上有效。当前的CRISPR/Cas9技术提供了可靠的在体外编辑培养的细胞中的基因的方法；然而，需要靶向体内不同器官中特定细胞的新方法。

发明概述

因此，提供了被工程化以高效地将CRISPR-Cas9携带至不同器官和肿瘤从而使得能够进行治疗性基因编辑以控制癌症和其他遗传性疾病的外排体。在一个实施方案中，提供了包含外排体的组合物，其中所述外排体在其表面上包含CD47，并且其中所述外排体包含CRISPR系统。在一些方面中，CRISPR系统包含内切核酸酶和指导RNA(gRNA)。在一些方面中，内切核酸酶是Cas内切核酸酶。在一些方面中，内切核酸酶是Cas9内切核酸酶。在另一些方面中，内切核酸酶是Cpfl内切核酸酶。在一些方面中，指导RNA是单gRNA。在一些方面中，单gRNA是CRISPR-RNA(crRNA)。在一些方面中，单gRNA包含crRNA和反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)的融合体(fusion)。在一些方面中，指导RNA包含crRNA和tracrRNA。在一些方面中，内切核酸酶和gRNA在外排体内的单个核酸分子上编码。在一些方面中，内切核酸酶和gRNA在外排体内的独立的核酸分子上编码。

在一些方面中，CRISPR系统靶向致病突变。在一些方面中，致病突变是致癌突变。在一些方面中，致癌突变是癌基因中的激活突变。在一些方面中，致癌突变是肿瘤抑制基因中的抑制性突变。在一些方面中，CRISPR系统靶向无成药性基因。在一些方面中，致癌突变是Kras^G12D。在一些方面中，外排体的至少2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％(或其中可导出的任何值)包含内切核酸酶和gRNA。