[发明专利]防止免疫结合物中的甲硫氨酸氧化的方法

说明书

本发明总体上涉及防止免疫结合物中的甲硫氨酸氧化的方法。本发明还涉及其中甲硫氨酸氧化的量减至最少的免疫结合物的药物组合物。

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2017年9月22日提交的美国临时申请号62/562,049、于2017年10月17日提交的美国临时申请号62/573,322以及于2018年7月31日提交的美国临时申请号62/712,584的提交日的权益。以上提到的申请中的每一者的全部内容以引用的方式并入本文中。

技术领域

本发明总体上涉及防止免疫结合物中的甲硫氨酸氧化的方法。本发明还涉及其中甲硫氨酸氧化量减至最少的免疫结合物的药物组合物。

背景技术

细胞结合剂-药物结合物(诸如抗体-药物结合物(ADC))为一类新兴的对多种癌症具有效力的强效抗肿瘤剂。细胞结合剂-药物结合物(诸如ADC)通常由三个不同的要素构成：细胞结合剂(例如，抗体)；接头；以及细胞毒性部分。细胞毒性药物部分可共价连接至抗体上的赖氨酸从而产生结合物，所述结合物为携带连接于抗体分子上不同位置处的不同数目的药物的ADC的非均质混合物。或者，细胞毒性药物部分可经由诸如马来酰亚胺基等硫醇反应性基团共价连接至抗体上的半胱氨酸硫醇基而形成位点特异性ADC。

已采用苯并二氮杂卓化合物，包括诸如吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)等三环苯并二氮杂卓以及诸如吲哚啉并苯并二氮杂卓等四环苯并二氮杂卓作为细胞毒性剂与抗体连接以产生ADC，所述ADC已显示出有前景的抗肿瘤活性。这些苯并二氮杂卓化合物含有亚胺键，亚胺键可结合至DNA小沟并且干扰DNA功能，从而引起细胞死亡。

因此，需要开发用于制备细胞结合剂与含亚胺的苯并二氮杂卓药物的结合物的新方法，以及这些结合物的在制造过程和/或储存期间稳定的新药物组合物。

发明内容

本发明是基于以下令人惊讶的发现，包含苯并二氮杂卓细胞毒性剂的免疫结合物可能易于发生甲硫氨酸氧化，特别是在存在光的情况下。与裸抗体的比较数据表明甲硫氨酸氧化至少部分由存在苯并二氮杂卓细胞毒性剂诱导。令人惊讶地发现抗体-苯并二氮杂卓免疫结合物的药物组合物中存在甲硫氨酸可使观测到的甲硫氨酸氧化的量减少。另外，抗体与苯并二氮杂卓细胞毒性剂之间的结合反应中存在甲硫氨酸抗氧化剂可显著减少所产生的免疫结合物中的甲硫氨酸氧化的量。

本发明的一个方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本文中所描述的免疫结合物以及0.1mM至20mM甲硫氨酸。

在某些实施方案中，本发明的药物组合物中的免疫结合物由下式表示：

CBA为抗体或其抗原结合片段；

W_C为1或2；并且

Cy^Cys由下式表示：

或其药学上可接受的盐，其中：

N与C之间的双线表示单键或双键，限制条件为当它为双键时，X不存在并且Y为-H或(C₁-C₄)烷基；并且当它为单键时，X为-H或胺保护部分，Y为-OH或-SO₃H；

R₁为-H或(C₁-C₃)烷基；

P₁为氨基酸残基或含有2至5个氨基酸残基的肽；

R_a和R_b在每次出现时独立地为-H、(C₁-C₃)烷基或带电取代基或可离子化基团Q；