[发明专利]用于确定抗CD26配体的生物活性的定量细胞方法

说明书

本发明涉及定量细胞方法，其用于体外确定抗CD26配体(优选抗CD26单克隆抗体(例如，倍格罗单抗)的作用。

技术领域

本发明涉及定量细胞方法，其用于体外确定抗CD26配体(优选抗CD26单克隆抗体(例如，倍格罗单抗(begelomab))的作用。

背景技术

CD26是在细胞表面和以可溶性形式表达的110kDa多功能糖蛋白。CD26抗原由各种组织和器官(例如，肺、内皮、心脏、脑、肝脏、肠、肾脏、胎盘、胰腺和骨骼肌)表达(AbbottC.A.等人,1994)。在细胞水平上，已发现CD26的表达在淋巴细胞群中(特别是在活化的T淋巴细胞中，在静息T淋巴细胞中和B淋巴细胞上)具有强的共刺激活性(Cordero OJ等人,2007)。实际上，在记忆T细胞的特定子集上，CD26的表达在T细胞自身活化后增加(MorimotoC.等人,1989)。T细胞上CD26的表达与这些细胞产生大量IL-2并响应促有丝分裂刺激而强烈增殖的能力有关。但是，CD26的表达与T辅助淋巴细胞的活性呈负相关(Mattern T.等人,1991)。

CD26的特征在于二肽基肽酶IV(DPP-IV)酶促活性。上述酶促活性特异性地促进在X-Pro位置的N末端氨基酸和相邻氨基酸之间的肽键的水解(Gorrel M.D.等人,2001)。CD26属于寡肽酶的一个子集，其能够从许多生物活性底物(例如，细胞因子、多肽、激素和趋化因子)中切割N末端二肽(De Meester I.等人,1999；Hildebrandt M.等人,2000)。

在人类中，CD26也参与与腺苷脱氨酶(ADA)的结合(Franco R.等人,1998)。ADA缺乏不仅通过免疫失调的一般机制而且通过嘌呤代谢的毒性代谢物的细胞内积累而易患免疫缺陷疾病(Sauer A.V.等人,2012)。

CD26与ADA之间的联系的可能作用实际上是调节局部细胞外腺苷浓度，其通过细胞表面的腺苷受体在T细胞内产生负信号。一些对CD26特异性的单克隆抗体在体外能够将活化信号传递给T细胞并调节免疫反应(Morimoto C.和Schlossman S.F等人,1998)。因此，CD26与炎症、免疫内分泌和神经功能的调节以及AIDS的病理生理学有关。

由于CD26无所不在的分布，许多病理状态与CD26的表达和/或活性改变相关，而CD26的表达和/或活性改变与相应病理状况的严重程度有关。这些疾病可以分为至少五类：自身免疫和炎性疾病、恶性血液肿瘤、精神神经内分泌病症、传染性疾病和实体肿瘤。许多研究人员已观察到，在各种免疫介导的疾病中，CD26的血清酶促活性水平似乎有所改变(Klemann C.等人,2016)。在临床研究中，已经观察到CD26的表达/活性的变化涉及各种自身免疫疾病，例如，类风湿性关节炎、多发性硬化、I型糖尿病和宿主中的移植排斥疾病(GvHD)。

施用高选择性CD26抑制剂的多个研究显示糖尿病的发病延迟、胰岛炎减少、调节性T细胞数量增加，提示CD26在免疫调节中的重要作用。

关于罹患类风湿性关节炎的患者的一些报道显示CD26表达/酶促活性、疾病的严重程度和治疗之间的相关性。这些发现可为旨在抑制CD26酶促活性的新的治疗方法铺平道路。此外，已经发现罹患多发性硬化的患者的血液和脑脊液中的T细胞表面上的CD26表达更高(Ohnuma K.等人,2011)。GvHD是造血干细胞移植(HSCT)后的主要并发症，HSCT是许多血液疾病的重要疗法(Ferrara J.L.M.等人,2009)。GvHD能够基于发病时间分为急性或慢性，并且是由移植源自供体骨髓的幼稚T细胞引起的，其损伤受体的组织(Henden A.S.,HillG.R.,2015)。GvHD代表了对骨髓移植作为一种挽救生命的疗法的用途的严格限制(WelniakL.A.等人,2007)。

GvHD的发展通常需要三个条件：(1)供体的骨髓必须含有免疫活性细胞，(2)受体必须表达供体中不存在的组织抗原，并且(3)受体不应该能够引发会破坏移植细胞的有效反应。