[发明专利]用于确定抗CD26配体的生物活性的定量细胞方法

权利要求书

1.一种用于体外确定抗CD26配体效力的方法，其包括以下步骤：

a)将以高于75％的百分比表达CD26受体的人T淋巴细胞群与浓度在0.001μg/ml至150μg/ml范围内的抗CD26配体在37℃下或在室温下孵育；

b)与用荧光染料标记的抗CD26抗体孵育，所述抗体识别与步骤a)中使用的抗CD26配体所识别的CD26表位不同的CD26表位；

c)通过细胞荧光分析确定用抗CD26配体处理的细胞样品测量的CD26的MFI值(MFI_T)和未处理的细胞的MFI值(MFI_NT)；

d)根据下式计算评估CD26受体的内化百分比(％int CD26)或RFI：

其中如果％intCD26的值：

-小于20％，表明抗CD26配体的低效力；

-在20％至30％范围内，表明抗CD26配体的中等效力；

-高于30％，表明抗CD26配体的高效力。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)中所述抗CD26配体的浓度在0.01μg/ml至100μg/ml范围内，更优选在0.01μg/ml至2μg/ml范围内，甚至更优选在0.01μg/ml至0.5μg/ml范围内。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中步骤a)中所述抗CD26配体是抗体或其片段。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述抗CD26抗体是单克隆抗体倍格罗单抗。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b)中所述荧光染料选自由下列各项组成的组：FITC、APC、PE、PE-Cy7、APC-H7、PerCP和PE-Cy5.5，优选APC。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤a)中所述人CD26+ T淋巴细胞群选自原代T淋巴细胞群和人T淋巴细胞的肿瘤细胞系。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述人T淋巴细胞的肿瘤细胞系是Karpas 299细胞系。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤c)中所述细胞荧光分析是通过FACS进行的。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括对步骤a)中所述人CD26+ T淋巴细胞群进行炎性细胞因子产生的抑制的测定步骤，所述炎性细胞因子选自由下列各项组成的组：IL-8、IL-1β、IL-6、IL-2、GM-CSF、IL-6和TNF-α。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述细胞因子产生的抑制通过MesoScaleDiscovery测定进行评估。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述人CD26+ T淋巴细胞群是Karpas 299细胞系。