[发明专利]用于选择性转导靶细胞的基于衔接子的逆转录病毒载体系统

说明书

本发明提供了一种组合物，该组合物包含：i)假型逆转录病毒载体颗粒或其病毒样颗粒，其包含a)具有抗原结合活性的一种包膜蛋白，其中所述包膜蛋白是不与至少一个其天然受体相互作用的重组蛋白，并在其胞外域与包含对标记的多肽的标签具有特异性的抗原结合结构域的多肽融合，并且其中所述包膜蛋白是源自副粘病毒科的蛋白G、HN或H，和b)源自副粘病毒科的具有融合活性的包膜蛋白；和ii)所述标记的多肽，其中所述标记的多肽与靶细胞表面上表达的抗原特异性结合，从而用所述逆转录病毒载体颗粒转导靶细胞或从而诱导病毒样颗粒摄取到靶细胞中。还公开了其药物组合物和用所述载体颗粒转导靶细胞的体外方法。

技术领域

本发明涉及具有对标签的特异性的假型逆转录病毒载体颗粒或其载体样颗粒(VLP)的领域，其中所述标签与结合至靶细胞上表达的抗原的多肽偶联，从而允许用所述逆转录病毒载体颗粒或其载体样颗粒靶向转导多个靶细胞部分。

背景技术

使用逆转录病毒载体进行基因递送是纠正缺陷基因并为细胞提供新功能的一种广泛使用的方法。然而，由于常用类型的逆转录病毒载体的性质，它们按照设计不是选择性的，这阻碍了逆转录病毒载体在许多治疗领域中的安全性特性和适用性。

通常，逆转录病毒载体是用水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus，VSV-G)的包膜蛋白假型化的。这种假型转导包括治疗相关细胞类型在内的广泛的靶细胞，但是它可能需要使用刺激剂进行预激活以达到足够的转导效率水平。

而且，在混合细胞群体中，需要如磁性细胞分选的选择程序以仅在限定的细胞类型中表达靶基因。因此，避免了导致潜在的副作用的脱靶群体的转导。

或者，测试了设计按照设计具有选择性并因此不需要预选择靶群体的LV系统的尝试。但是，这些系统在选择性、生产率或适用性方面受到限制。

US20160333374描述了一种基于与VSV-G的胞外域融合的抗体片段如scFV(VSVG-scFV)的系统。目标是将VSV-G的有利生产率与scFV的特异性结合起来。该方法能够实现与靶抗原的结合，但是VSVG-scFV不能介导逆转录病毒与靶细胞膜的融合，并因此也不能介导转导。为了克服这一障碍，必须将未修饰的VSV-G与VSVG-scFV共同展示。因此，功能性但非选择性的VSV-G与选择性但非功能性VSV-G-scFV的共同展示仅导致靶抗原表达细胞的优先转导。但最重要的是，由于(非选择性)天然VSV-G的保留功能，不表达靶抗原的细胞也被转导。因此，该系统有利于靶抗原表达细胞的转导，但不是真正选择性的。

较高选择性对于已融合至scFV的用包含具有融合活性的蛋白(F蛋白)和具有抗原结合活性的蛋白(H蛋白)的麻疹病毒包膜蛋白(MV-LV)假型化的重靶向慢病毒载体观察到(WO2008/037458A2)。已经对该系统的广泛应用在体外而且在体内进行了多种抗原的测试(Anliker等(2010))。然而，对于靶向逆转录病毒载体的各自特异性，需要单独的逆转录病毒生产。因此，该系统不允许逆转录病毒载体特异性的完全灵活性。而且，从而对靶向细胞群体的转导效率的控制，例如，通过整合的载体拷贝数(VCN)来控制目的基因的表达率受到限制。

不仅成功地用截短的麻疹病毒包膜蛋白对慢病毒载体进行了假型化，而且对γ逆转录病毒载体也进行了成功的假型化(Edes(2016)，Frecha等(2008))。有趣的是，在γ-逆转录病毒载体的情况下，与对于慢病毒载体假型化测试的变体相比，用略有不同的截短变体测量了最高的逆转录病毒载体滴度。尽管这些系统是功能性的，但已观察到一些技术缺陷。例如，逆转录病毒载体滴度高度依赖于生产过程中(即转染HEK-293T细胞时)嵌合H-scFV蛋白的表面表达水平。特别地，已经显示出scFV的框架区的序列影响所展示的scFV的生物物理特性，并因此影响功能性逆转录病毒载体滴度(Friedel等(2015))。