[发明专利]因子VIII或因子IX基因敲除兔、其制备方法及其用途在审
| 申请号： | 201880068875.1 | 申请日： | 2018-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN111492060A | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | 金少罗;郑明恩;金民静;曺胜贤;黄成虎;郭曦天;李秀珉;南铉子 | 申请（专利权）人： | 株式会社绿十字;财团法人牧岩生命科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/10;C12N15/113;C12N9/22;C12N9/10;C12N9/64;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 陈桉 |
| 地址： | 韩国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 因子 viii ix 基因 制备 方法 及其 用途 | ||
1.一种SgRNA，所述SgRNA包含与因子VIII(FVIII)或因子IX(FIX)的外显子区域互补结合的靶向结构域。
2.根据权利要求1所述的sgRNA，其中所述因子VIII(FVIII)基因的外显子区域是由SEQID NO:1的碱基序列表示的外显子区域。
3.根据权利要求1所述的sgRNA，其中所述因子IX(FIX)基因的外显子区域是由SEQ IDNO:2的碱基序列表示的外显子区域。
4.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求1至3中任一项所述的sgRNA。
5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸由SEQ ID NO:3至6中的任何一个的碱基序列表示。
6.一种载体，所述载体具有插入其中的根据权利要求4所述的多核苷酸。
7.一种CRISPR/Cas系统，所述CRISPR/Cas系统包含根据权利要求6所述的载体。
8.一种转基因兔，所述转基因兔使用根据权利要求7所述的CRISPR/Cas9系统产生。
9.根据权利要求8所述的转基因兔，其中通过如下方法产生所述转基因兔，所述方法包括：
(a)转录根据权利要求7所述的CRISPR/Cas9系统以产生sgRNA和Cas9mRNA；
(b)将步骤(a)中产生的mRNA引入胚胎中并培养所述胚胎；以及
(c)将步骤(b)中获得的胚胎移植到代孕母体中以产生所述转基因兔。
10.根据权利要求9所述的转基因兔，其中所述转基因兔通过如下方法产生，所述方法进一步包括在所述兔产生后确定是否发生转化。
11.一种转基因兔后代，所述转基因兔后代通过如下方法产生，所述方法包括将根据权利要求9所述的转基因兔杂交以产生所述转基因兔后代。
12.根据权利要求11所述的转基因兔后代，其中将所述转基因兔杂交是通过与根据权利要求9所述的转基因兔或与正常兔杂交来进行的。
13.根据权利要求8至12中任一项所述的转基因兔后代，其中所述转基因兔或转基因兔后代因为敲除了因子VIII或因子IX而展现出血友病表型。
14.一种细胞、组织和副产物，所述细胞、组织和副产物从根据权利要求8所述的转基因兔或根据权利要求11所述的转基因兔后代分离。
15.根据权利要求14所述的细胞、组织和副产物，其中所述副产物选自血液、血清、尿液、粪便、唾液、器官和皮肤。
16.一种产生转基因兔的方法，所述方法包括：
(a)转录根据权利要求7所述的CRISPR/Cas9系统以产生sgRNA和Cas9mRNA；
(b)将步骤(a)中产生的mRNA引入胚胎中并培养所述胚胎；以及
(c)将步骤(b)中获得的胚胎移植到代孕母体中以产生所述转基因兔。
17.一种产生转基因兔后代的方法，所述方法包括将通过根据权利要求16所述的方法产生的转基因兔杂交以产生所述转基因兔后代。
18.根据权利要求17所述的方法，其中将所述转基因兔杂交是通过与通过根据权利要求16所述的方法产生的转基因兔或与正常兔杂交来进行的。
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