[发明专利]合胞素用于将药物和基因靶向递送至再生肌肉组织的用途

说明书

本发明涉及将药物靶向递送(包括基因递送)至再生肌肉组织的药物组合物，其至少包含与合胞素蛋白结合的治疗性药物或基因，及其在预防和/或治疗肌肉损伤或疾病中的用途，特别是在使用用合胞素蛋白假型化的慢病毒载体颗粒或慢病毒样颗粒基因治疗所述疾病中的用途。

技术领域

本发明涉及靶向再生肌肉组织的药物组合物及其在预防和/或治疗肌肉损伤或疾病中的用途。更特别地，本发明涉及合胞素用于通过注射将药物靶向递送(包括基因递送)至再生肌肉组织的用途。

背景技术

基因治疗可能为多种不同类型的遗传源的肌病提供治愈，但证明该途径是一项艰巨的努力。基因转移到骨骼肌存在很多困难。在肌肉中测试的各种载体已被证明具有免疫原性，并且目前，仅非炎性重组腺相关载体(rAAV)仍在临床前和临床研究中使用，旨在进行肌肉中的基因转移。这些rAAV在靶细胞中保持游离，并且由于它们不整合，因此无法在复制细胞中传播。这种作用方式对于分化后的有丝分裂组织(例如成年骨骼肌纤维)中的基因转移有用，但可能不允许在具有高增殖潜能的肌肉祖细胞中或在经历高度再生过程的肌肉组织中的长期基因表达。rAAV的第二个局限性是它的载量小，目前限制为4.5Kb，这阻止了该载体系统用于大基因(例如肌营养不良蛋白)的用途。另外，尽管rAAV不是炎性载体，但它仍能够诱导对其病毒衣壳的强免疫应答，如临床前模型和临床试验所证实的。除非向患者施用免疫抑制治疗，否则目前不可能再施用相同血清型的rAAV，而且在基因治疗的获益/风险分析中并非总是可能的。因此，需要另外的、新颖的、更加生理的基因治疗载体，其具有高载量并且可以允许基因转移到再生肌肉或肌肉祖细胞中。

作为大小约为120nm的包膜RNA颗粒的慢病毒载体(LV)是有效的药物递送工具，并且更特别是用于稳定的长期转导的有效基因递送工具。LV通过赋予其假型的包膜蛋白结合并进入靶细胞。一旦LV进入细胞，它释放衣壳成分并经历慢病毒RNA的逆转录，然后将前病毒DNA永久整合到靶细胞的基因组中。因此，LV使基因稳定地转移到复制细胞中。非整合型慢病毒载体已通过修改载体整合机制的特性而产生，并且可用于瞬时基因表达。缺乏前病毒的病毒样颗粒也已产生，并且可用于递送蛋白质或信使RNA。例如，LV可以用于基因添加、RNA干扰、外显子跳跃或基因编辑。所有这些途径都可以经由LV的假型通过组织或细胞靶向来实现。

LV最常用的假型是水泡性口炎病毒的G糖蛋白(VSVg)。VSVg的广泛趋向性可以在体外将普遍存在的基因递送至许多不同类型的细胞。LV-VSVg通常在造血系统基因治疗的情况下离体使用或用于产生CAR T细胞。LV还用于体内的一些应用中，其中向脑或眼施用少量载体。通常不进行LV-VSVg的全身施用，因为已知这些载体在小鼠体内具有免疫原性。实际上，体内VSVg结合补体，并且当体内使用时，其将转基因靶向递送至肝脏和淋巴器官，从而触发抗转基因免疫应答(Ciréet al.Plos One 9,e101644,2014)。因此，需要能够提供稳定的体内基因递送而不损失表达转基因的细胞的LV的新假型。这对于将基因转移到肌肉，特别是再生肌肉组织和肌肉祖细胞中可能是有用的。实际上，LV具有大载量，并且最近已表明可将肌营养不良蛋白cDNA(11kb)装配到LV盒中(Counsell et al.Sci.Report,2017,7:46880.doi:10.1038)，提供了治疗所有杜兴氏肌营养不良症患者的可能策略。