[发明专利]用于使用氧化铁颗粒提取核酸的方法和组合物

权利要求书

1.一种从初始生物样品中产生提取的核酸样品的方法，所述方法包括：

(a)使包含核酸的初始生物样品与蛋白酶K在范围为47℃至53℃的温度下接触范围为10至40分钟的时间段，以降解所述样品中存在的蛋白质，从而产生蛋白酶K处理过的样品；

(b)在酸性条件下使所述蛋白酶K处理过的样品与氧化铁颗粒接触，以诱导所述氧化铁颗粒与所述核酸之间的结合；

(c)从所述蛋白酶K处理过的样品中磁性分离所述核酸结合的氧化铁颗粒；

(d)使所述核酸结合的氧化铁颗粒与碱性洗脱缓冲液接触，以将所述核酸从所述氧化铁颗粒释放到所述碱性洗脱缓冲液中，从而产生碱性核酸样品；以及

(e)从所述碱性核酸样品中磁性分离所述氧化铁颗粒，

从而产生提取的核酸样品。

2.如权利要求1所述的方法，其还包括在步骤(e)的所述磁性分离之后，通过使所述碱性核酸样品与缓冲溶液接触来中和所述碱性核酸样品，以产生所述提取的核酸样品。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中在步骤(b)中将所述蛋白酶K处理过的样品与包含所述氧化铁颗粒的可溶解膜接触，由此所述膜溶解并释放所述氧化铁颗粒。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述膜由包含以下一种或多种的材料形成：羟烷基甲基纤维素；羧甲基纤维素；羧酸羟烷基酯单体；乙氧基化(甲基)丙烯酸羟烷基酯；丙氧基化(甲基)丙烯酸羟烷基酯；聚乙二醇(PEG)；聚乙烯醇(PVA)；及其组合。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述提取的核酸样品包含微RNA。

6.如权利要求5所述的方法，其还包括鉴定与一种或多种所述微RNA结合的生物分子的步骤。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述方法不包括使用氯仿或苯酚。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述方法在少于30分钟内完成。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在步骤(b)之前和/或步骤(e)之后，从所述蛋白酶K处理过的样品中消耗丰富的微RNA。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述丰富的微RNA选自由以下组成的群组：miR-191、miR-320、miR-29b、miR-143、miR-145和miR-424。

11.如权利要求9或权利要求10所述的方法，其中所述消耗包括(i)使所述蛋白酶K处理过的样品与缀合至与所述丰富的微RNA杂交的核酸探针的氧化铁颗粒接触，和(ii)从所述蛋白酶K处理过的样品中分离与所述丰富的微RNA杂交的所述探针缀合的氧化铁颗粒。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其还包括测量所述提取的核酸样品中存在的一种或多种核酸的丰度。

13.一种氧化铁颗粒群体，其包含缀合至与丰富的微RNA互补的核酸探针的氧化铁颗粒。

14.一种可溶解膜，其包含如权利要求13所述的氧化铁颗粒群体。

15.一种试剂盒，其包含：

氧化铁颗粒；蛋白酶K；用于使核酸与所述氧化铁颗粒结合的酸性缓冲液；用于从所述氧化铁颗粒中释放核酸的碱性洗脱缓冲液；以及对照微RNA。