[发明专利]对病毒生产有效载荷具有低毒性的经修饰的EC7细胞

权利要求书

1.一种产生多个重组治疗性病毒的方法，该方法包括：

提供重组宿主细胞，该重组宿主细胞经基因修饰以产生降低病毒有效载荷mRNA在该重组宿主细胞中的表达的shRNA，并且其中该病毒有效载荷mRNA在3’-UTR中具有针对该shRNA的结合位点；

用重组病毒转染该重组宿主细胞，该重组病毒包含编码该病毒有效载荷mRNA的核酸序列；以及

在降低该病毒有效载荷mRNA在该宿主细胞中的表达并产生至少一个预定病毒滴度的条件下培养所转染的宿主细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中该宿主细胞是CHO细胞或EC7细胞。

3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该宿主细胞进一步从重组核酸表达CXADR。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该宿主细胞经基因修饰以产生至少一种第二shRNA，该至少一种第二shRNA降低该病毒有效载荷mRNA在该重组宿主细胞中的表达，并且其中该病毒有效载荷mRNA在3’-UTR中具有针对该第二shRNA的结合位点。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该宿主细胞经基因修饰以产生至少一种第二shRNA，该至少一种第二shRNA降低第二有效载荷mRNA在该重组宿主细胞中的表达，并且其中第二病毒有效载荷mRNA在3’-UTR中具有针对该第二shRNA的结合位点。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该shRNA的产生处于诱导型启动子的控制下。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该重组病毒是腺病毒。

8.如权利要求7所述的方法，其中该腺病毒是E2b缺失型腺病毒。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该病毒有效载荷基因编码细胞因子、嵌合蛋白、肿瘤相关抗原和新表位中的至少一种。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该预定病毒滴度为至少10⁹个病毒粒子/ml。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在具有不同病毒有效载荷基因的不同重组病毒之间变异性等于或小于20％的时间段内达到该预定病毒滴度。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在具有不同病毒有效载荷基因的不同重组病毒之间变异性等于或小于10％的时间段内达到该预定病毒滴度。

13.一种重组病毒，该重组病毒包含序列，该序列编码重组有效载荷的mRNA且具有3’-UTR区段，该3’-UTR区段具有针对shRNA的至少一个结合位点，该shRNA在施用该病毒的患者细胞中不存在。

14.如权利要求13所述的重组病毒，其中该病毒是腺病毒。

15.如权利要求13-14中任一项所述的重组病毒，其中该有效载荷是细胞因子、嵌合蛋白、肿瘤相关抗原和新表位中的至少一种。

16.如权利要求13-15中任一项所述的重组病毒，其中该结合位点针对萤光素酶shRNA、lacZ shRNA或β-内酰胺酶shRNA。

17.如权利要求13-16中任一项所述的重组病毒，该重组病毒具有至少一个针对第二shRNA的第二结合位点，该第二shRNA在施用该病毒的该患者细胞中不存在。