[发明专利]增强的嵌合抗原受体及其用途

说明书

本文提供了嵌合抗原受体(CARs)，其中在所述CAR和/或人源化scFv的铰链区中包含截短的EGFRvIII(Ev3)。本文还提供了表达所述CAR的免疫细胞及其在免疫疾病治疗中的使用方法。

本申请要求2017年7月25日提交的美国临时申请序列号62/536,934的优先权，其全部内容通过引用合并于此。

引入序列表

于2018年7月23日创建的名为“UTFCP1331WO.txt”的文件中包含的大小为289KB(在MicrosoftWindows中测量的)的序列表在此通过电子提交方式提交，并通过引用并入本文。

背景

1.领域

本发明总体上涉及免疫学和分子生物学领域。更特别地，本发明涉及增强的嵌合抗原受体(CAR)，例如用于免疫细胞。

2.相关技术描述

尽管可供用于诊断出癌症的患者的诊断和治疗选择方面有了技术进步，但预后通常仍然很差，许多患者无法治愈。免疫疗法有望为诊断出各种肿瘤的患者提供有效而靶向的治疗，并有可能根除恶性肿瘤细胞而不损害正常组织。从理论上讲，免疫系统的T细胞能够识别肿瘤细胞特异性的蛋白质模式，并通过多种效应子机制介导它们的破坏。施用表达嵌合抗原受体(CARs)的免疫细胞，例如过继T细胞疗法或NK细胞疗法，是一种试图利用和扩大患者自身免疫细胞的消灭肿瘤的能力，然后将这些效应子以有效消除残留的肿瘤、但又不损害健康的组织的状态返回患者的尝试。通常，CAR包含特异性针对肿瘤相关抗原(TAA)的抗体的单链可变区片段(scFv)，所述片段通过铰链和跨膜区与T细胞信号传导分子的胞质域偶联。然而，免疫细胞疗法的临床使用中的许多缺点损害了该方法在癌症治疗中的充分利用。因此，仍然需要有用于免疫细胞疗法的改进的CAR。

概述

在某些实施方案中，本公开提供了增强的嵌合抗原受体及其用于治疗疾病和病症、包括癌症和自身免疫病症的方法。在一个实施方案中，提供了被称为Ev3(或tEv3)的截短的EGFRvIII，其不包含胞内域或功能性EGF结合结构域。在特定方面，Ev3包含EGFR的截短的结构域1(L1)，截短的结构域2(CR1)，结构域3(L2)和结构域4(CR2)(如图2B所示)。在一些方面，Ev3可以位于CAR的铰链区中，并且可以用于CAR表达细胞的CAR检测和/或消融。在一些实施方案中，CAR包括人源化scFv和Ev3铰链。在另一个实施方案中，提供了用于CAR的人源化抗原结合结构域，例如人源化单链可变片段(scFv)。进一步的实施方式提供了通过向受试者施用表达所述实施方式的CAR的免疫细胞，例如T细胞或NK细胞，来治疗免疫相关疾病的方法。

在另一个实施方案中，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，其在所述CAR的铰链中包含Ev3，其中所述Ev3铰链连接细胞外结构域和至少一个细胞内免疫信号传导结构域。在一些方面，Ev3铰链包含EGFRvIII的跨膜结构域和非功能性胞外域(ectodomain)。在特定方面，Ev3铰链不包含EGFRvIII胞内域(endodomain)。在一些方面，EGFRvIII的非功能性胞外域基本上不具有与表皮生长因子(EGF)的结合能力。

在一些方面，Ev3铰链包含与SEQ ID NO：2具有至少80％、例如至少81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％的序列同一性的氨基酸序列。在一些方面，所述Ev3铰链包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列。