[发明专利]用于结核病诊断的试剂盒和用于通过使用所述试剂盒来诊断结核病的方法

权利要求书

1.一种用于同时诊断结核病和非结核性分枝杆菌病的试剂盒，所述试剂盒包括：

(a)(i)引物，其包含特异性结合结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)特异性基因的互补结合区以及包括非互补于所述结核分枝杆菌特异性基因的核苷酸的核酸寡聚体，和

(ii)引物，其包含特异性结合分枝杆菌共有基因的互补结合区以及包括非互补于分枝杆菌共有的所述基因的核苷酸的核酸寡聚体；和

(b)膜，其上固定有互补结合各个核酸寡聚体的探针。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述试剂盒同时诊断两种或更多种结核分枝杆菌特异性基因。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述结核分枝杆菌特异性基因包括IS6110和mtp40。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其中分枝杆菌共有的所述基因是rpoB。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述核酸寡聚体具有20bp至60bp的长度。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述互补结合区与包括非互补核苷酸的所述核酸寡聚体之间包含非核苷酸间隔体。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述引物选自下组：SEQ ID NO:1-6。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括包含标记的引物。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其中所述引物具有SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8。

10.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，当把通过所述引物扩增的产物注射到所述膜的侧面中时，所述扩增产物被转移，从而使固定在所述膜上的所述探针与包括在所述扩增产物中的所述核酸寡聚体互补杂交。

11.根据权利要求1所述的试剂盒，其中互补结合各核酸寡聚体的所述探针包含一种或多种选自下组的序列：SEQ ID NO:9-11。

12.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述探针进一步包含固定于所述膜上的核酸寡聚体。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其中所述进一步添加的核酸寡聚体包含序列SEQID NO:12或SEQ ID NO:13。

14.根据权利要求8所述的试剂盒，其中所述标记为生物素、Cy5、Cy3、FITC、5-(2'-氨基乙基)氨基-1-萘磺酸(EDANS)、四甲基若丹明(TMR)、异氰酸四甲基若丹明(TMRITC)、x-若丹明、DIG、或与其结合的抗体或纳米粒子。

15.根据权利要求8所述的试剂盒，其中通过所述标记与结合剂之间的反应诱导显色。

16.根据权利要求15所述的试剂盒，其中所述结合剂为链霉亲和素。

17.一种使用如权利要求1至16中任一项所述的试剂盒在体外同时诊断结核病和非结核性分枝杆菌病的方法，所述方法包括：

扩增从样品提取的核酸，所述扩增使用(i)引物，其包含特异性结合结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)特异性基因的互补结合区以及包括非互补于所述结核分枝杆菌特异性基因的核苷酸的核酸寡聚体和(ii)引物，其包含特异性结合分枝杆菌共有的基因的互补结合区以及包括非互补于分枝杆菌共有的所述基因的核苷酸的核酸寡聚体；以及

将所扩增的产物加载至膜，所述膜上固定有互补结合各个核酸寡聚体的探针。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述样品为痰、培养物、组织或支气管灌洗液。