[发明专利]从宿主细胞半乳糖凝集素和其他污染物中纯化糖基化蛋白的方法

说明书

公开了一种从污染物中纯化经糖基化的重组目的蛋白的方法，该方法适用于工业生产目的，以从重组的治疗性蛋白质中去除半乳糖凝集素和其他宿主细胞污染物(例如金属阳离子)。

本申请要求于2017年8月17日在美国专利商标局提交的美国临时专利申请序列号62/546,558的优先权。

序列表

本申请包含序列表，该序列表已以ASCII格式电子提交，其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII副本创建于2018年8月14日，名称为JUST0381_SL.txt，大小为4,148字节。

技术领域

发明领域

本发明涉及从污染的宿主细胞蛋白质和金属离子中纯化重组产生的蛋白质的方法。

背景技术

相关技术的讨论

重组治疗性蛋白质的工业生产要求从目的蛋白质中有效去除污染性宿主细胞蛋白质和金属离子，以满足严格的监管标准。

当糖基化的重组蛋白富含末端β-半乳糖残基时，从与这些半乳糖苷残基可逆地结合的宿主细胞蛋白半乳糖凝集素(galectin)中纯化重组蛋白是关键问题。

半乳糖凝集素是可特异性结合β-半乳糖苷的动物凝集素。脊椎动物中已描述了十二种半乳糖凝集素，它们属于三个不同的亚组：原型半乳糖凝集素(例如，半乳糖凝集素-1，-2，-7，-10，-13，-14)、串联重复型半乳糖凝集素(例如，半乳糖凝集素-4，-8，-9，-12)和嵌合型半乳糖凝集素(例如，半乳糖凝集素-3)。据报道，这些半乳糖凝集素蛋白参与宿主细胞中的细胞相互作用和肿瘤转化。(参见，例如，Varki A、Cummings RD、Esko JD、FreezeHH、Stanley P、Bertozzi CR、Hart GW、Etzler ME编写的Essentials of Glycobiology(《糖生物学概要》)第2版，Cold Spring Harbor(纽约)：Cold Spring Harbor LaboratoryPress(纽约冷泉港：冷泉港实验室出版社)，2009年，第33章：Cummings RD和Liu FT，Galectins(半乳糖凝集素)；Gitt，MA等，Galectin-4 and galectin-6are two closelyrelated lectins expressed in mouse gastrointestinal tract(半乳糖凝集素-4和半乳糖凝集素-6是在小鼠胃肠道中表达的两种密切相关的凝集素)，J Biol Chem.273(5)：2954-60(1998)；Bidon，N.等，Galectin-8：a complex sub-family of galectins(Review)(半乳糖凝集素-8：一种半乳凝素的复杂亚家族(综述))，Int J Mol Med.8(3)：245-50(2001)；Hadari，YR等，Galectin-8.A new rat lectin，related to galectin-4(半乳糖凝集素-8：与半乳糖凝集素-4有关的新的大鼠凝集素)，J Biol Chem.270(7)：3447-53(1995)；Sato，M.等，Functional analysis of the carbohydrate recognition domainsand a linker peptide of galectin-9as to eosinophil chemoattractant activity(半乳糖凝集素-9的碳水化合物识别域和连接肽的关于嗜酸性粒细胞趋化活性的功能分析)，Glycobiology 12(3)：191-97(2002)；Yang，RY等，Cell cycle regulation bygalectin-12，a new member of the galectin superfamily(半乳糖凝集素超家族新成员半乳糖凝集素-12对细胞周期的调节)，J Biol Chem.276(23)：20252-60(2001)；Ramaswamy，S等，Structural basis of multivalent galactose-based dendrimerrecognition by human galectin-7(人半乳糖凝集素-7识别多价半乳糖基树枝状聚合物的结构基础)，FEBS J.2015Jan；282(2)：372-87(2015)；Patnaik，SK等，Complex N-glycansare the major ligands for galectin-1，-3，and-8on Chinese hamster ovary cells(复合型N-聚糖是中国仓鼠卵巢细胞中半乳糖凝集素-1、-3和-8的主要配体)，Glycobiology 16(4)：305-17(2006))。