[发明专利]无缝核酸装配方法

说明书

本文提供了用于无缝核酸装配的方法、系统和组合物。本文提供的方法、系统和组合物提供了核酸的有效装配而无需引物去除。用于无缝核酸装配的方法、系统和组合物包括使用内切核酸酶或外切核酸酶，任选地结合额外的酶，以装配核酸或多核苷酸。

交叉引用

本申请要求2018年4月26日提交的第62/663,089号美国临时专利申请和2017年6月12日提交的第62/518,496号美国临时专利申请的权益，所述临时申请中的每一个均通过引用整体并入本文。

序列表

本申请含有序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。创建于2018年6月6日的所述ASCII副本被命名为4854-746_601_SL.txt，大小为1,585个字节。

背景技术

从头核酸合成是基础生物学研究和生物技术应用的强大工具。尽管已知用于以小规模合成核酸的相对较短片段的各种方法，但这些技术在可扩展性、自动化、速度、精确度和成本方面却不尽人意。因此，仍然需要有效的无缝核酸装配方法。

发明内容

本文提供了核酸合成和装配方法，其包括：(a)提供多个多核苷酸，以及(b)将所述多个多核苷酸与外切核酸酶、瓣状内切核酸酶、聚合酶和连接酶混合，其中基于相邻多核苷酸之间的互补序列，所述多个多核苷酸以持续的预定顺序退火。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述外切核酸酶是外切核酸酶III。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述瓣状内切核酸酶是瓣状内切核酸酶1、外切核酸酶1、XPG、Dna2或GEN1。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述聚合酶具有5’至3’聚合酶活性。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述聚合酶是DNA聚合酶。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述连接酶催化至少两个核酸的连接。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述瓣状内切核酸酶1的浓度在约0.32U至约4.8U的范围内。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述外切核酸酶III的浓度在约0.1U至约10U的范围内。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述外切核酸酶III的浓度在约0.5U至约1.0U的范围内。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述外切核酸酶III的浓度在约1.0U至约2.0U的范围内。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述聚合酶的浓度在约0.1U至约2U的范围内。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述聚合酶的浓度约为0.1U。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述聚合酶的浓度约为0.2U。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述连接酶的浓度至多约为2.0U。本文进一步提供了核酸合成和装配方法，其中所述连接酶的浓度在约4.0U至约8.0U的范围内。