[发明专利]X型胶原α1测定法

说明书

与氨基酸序列H₂N‑GIATKGLNGP中包含的X型胶原α1的N末端新表位特异性反应的抗体、及其在评估与X型胶原α1相关的疾病(例如骨关节炎)的免疫分析中的用途。

技术领域

本发明涉及与X型胶原α1的N末端新表位特异性反应的抗体、及其在检测和定量X型胶原α1的免疫测定方法中的用途。

背景技术

骨关节炎(OA)是一种常见的关节疾病，其特征是软骨损伤和关节功能丧失。OA的病因包括多种因素，包括衰老、肥胖、外伤和遗传[1]。由于该疾病的异质性和复杂性，人们对OA的发病机理了解甚少。

值得注意的是，OA的某些特征类似于软骨内骨化在骨骼发育过程中的软骨细胞分化过程。在健康的关节软骨中，软骨细胞抵抗增殖和终末分化。相比之下，患病软骨中的软骨细胞逐渐增生并肥大。此外，开始了关节软骨的血管化和局部钙化[2-5]。调节软骨细胞分化的分子事件仍然是未知的，但是OA中软骨细胞肥大样变化已引起更多研究关注[6-8]。

X型胶原α1

X型胶原α1是非原纤维，但与软骨胶原蛋白结合形成细小的细胞细丝。从软骨细胞培养物中或从软骨分离的分子是59kDa X型胶原α1链的同三聚体，并且已经报道了约75kDa的X型胶原的重组分子[9]。X型胶原α1与VIII型胶原蛋白具有相似的结构域结构：50kDa的中央三螺旋(COL1)域位于N末端(NC2)和C末端(NC1)非三螺旋域[10]。另外，两种胶原类型都代表六边形晶格结构的主要成分，其中胶原分子通过涉及非三螺旋末端区域的相互作用而连接在一起。

X型胶原α1分布仅限于长骨，椎骨和肋骨的生长区以及成年(21岁)甲状腺软骨的正常胎儿肥大性软骨，在这种情况下，由于软骨基质的存在，它可能会提供一个支架以防止局部塌陷软骨内骨化过程中去除[11]。它也存在于骨折、骨关节炎软骨和成软骨肿瘤中，并且可能与软骨矿化有关。

骨关节炎

OA通常被认为是滑膜关节(主要是膝盖和臀部)的非炎性疾病。软骨细胞肥大和软骨钙化是OA的关键病理事件。网络形成的X型胶原蛋白的高表达被认为是软骨细胞肥大的特定信号[12-15]，因此，X型胶原蛋白可用作所述疾病的可检测标记。

有几种与肥大软骨细胞相关的蛋白质，例如X型胶原、MMP13、骨桥蛋白、骨钙素[16]、Indian Hedgehog[17]、Runx2[18]、VEGF[19]、HtrA1[20]和转谷氨酰胺酶-2(TG-2)[21]。X型胶原和MMP13是最肥大的软骨细胞标记。然而，MMP13的合成可通过炎症和机械应力在软骨细胞中诱导[22-23]。因此，作为肥大性软骨细胞特异性标志物的X型胶原蛋白可以表明软骨细胞的表型改变。

下因此，准确地定量生物样品中的X型胶原蛋白或其片段的量的方法可以允许更好地理解X型胶原蛋白的病理学或影响X型胶原蛋白周转的诸如OA的生理过程。显然，需要这种方法。

发明概述

发明人现已发现，组织蛋白酶K在⁴⁷⁸A-G⁴⁷⁹之间的肽键处裂解X型胶原α1，从而导致形成N末端新表位生物标记H₂N-⁴⁷⁹GIATKGLNGP(SEQ ID NO:1)。X型胶原α1的这种新表位生物标记物已显示与骨关节炎良好相关。

因此，本发明的第一方面涉及抗体，其中所述抗体与氨基酸序列H₂N-GIATKGLNGP(SEQ ID NO:1)中包含的X型胶原α1的N末端新表位特异性结合。

优选地，抗体特异性结合N末端氨基酸序列H₂N-GIATKG(SEQ ID NO:2)。