[发明专利]扩增胆管细胞的方法

权利要求书

1.用于在体外扩增原代胆管细胞的方法，其包括：

(i)提供分离的原代胆管细胞群体，和；

(ii)在包含表皮生长因子(EGF)、经典的Wnt信号传导抑制剂和非经典的Wnt信号传导增效剂的扩增培养基中培养所述群体以产生扩增的胆管细胞群体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述胆管细胞在所述扩增培养基中形成类器官。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述原代胆管细胞是肝外胆管细胞。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述原代胆管细胞是肝内胆管细胞。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述扩增培养基是包含表皮生长因子(EGF)、经典的Wnt信号传导抑制剂和非经典的Wnt信号传导增效剂的营养培养基。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非经典的Wnt信号传导增效剂是Wnt激动剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述Wnt激动剂是R-脊椎蛋白。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经典的Wnt信号传导抑制剂是Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述原代胆管细胞可从来自供体个体的原代胆汁组织获得或分离。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将群体在所述扩增培养基中以3D培养进行培养。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增培养基还包含骨架基质。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中扩增培养基包含骨架基质和补充有以下的营养培养基：(i)EGF、(ii)所述经典的Wnt抑制剂和(iii)所述非经典的Wnt增效剂。

13.根据权利要求12所述的方法，其中扩增培养基由骨架基质和补充有以下的营养培养基组成：(i)EGF、(ii)所述经典的Wnt抑制剂和(iii)所述非经典的Wnt增效剂。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述营养培养基是化学限定的。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述化学限定的营养培养基是威廉姆斯E培养基，其任选地补充有以下中的一种或多种：烟酰胺、碳酸氢钠、2-磷酸-L-抗坏血酸三钠盐、丙酮酸钠、葡萄糖、HEPES、ITS+预混物、地塞米松、glutamax、青霉素和链霉素。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中原代胆管细胞是人的。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述原代胆管细胞群体不含干细胞。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述扩增的群体中的胆管细胞表达CK7、CK18、CK19、HNF1B、γ谷氨酰转移酶(GGT)、Jagged 1(JAG1)、NOTCH2、CFTR、SCR、SSTR2、顶膜盐和胆汁转运蛋白(ASBT)、水通道蛋白1和阴离子交换蛋白2。

19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述扩增的群体中的胆管细胞表现出ALP活性、GGT活性、MDR1介导的分泌、对分泌素和生长抑素的生理响应、胆酸输出、CFTR介导的氯离子转移、对ATP和乙酰胆碱的生理响应以及响应于VEGF而增加的增殖。