[发明专利]用于纯化源自人胚胎干细胞的内胚层和胰腺内胚层细胞的方法

权利要求书

1.一种纯化胰腺祖细胞的方法，包括：

(a)将源自多能干细胞、诱导多能干细胞和/或胚胎干细胞的包含胰腺祖细胞的细胞群暴露于结合胰腺祖细胞上的细胞表面标志物的配体，其中所述细胞表面标志物为CD177，和

(b)使所述胰腺祖细胞与源自多能干细胞、诱导多能干细胞和/或胚胎干细胞的不结合所述配体的细胞相分离，由此纯化所述胰腺祖细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述胰腺祖细胞表达FOXA2、SOX17、CER1和/或CXCR4，优选地表达CER1。

3.根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括将所述细胞群暴露于结合CD51和/或CD275的配体的步骤。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述配体为抗体或其结合片段。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述配体与标记缀合。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过定量聚合酶链反应(qPCR)检测所述标志物的表达。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过流式细胞术检测所述标志物的表达。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分离步骤包括亲和色谱法。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述分离步骤包括流式细胞术。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述胰腺祖细胞为人的。

12.一种纯化的组合物，包含至少50％的CD177阳性的胰腺祖细胞。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述胰腺祖细胞被结合至配体，所述配体结合所述胰腺祖细胞上的CD177。

14.根据权利要求12或13所述的组合物，其中所述胰腺祖细胞为人的。

15.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，或根据权利要求12至14中任一项所述的组合物，其中将所述配体固定在捕获介质上。

16.根据权利要求15所述的方法或组合物，其中所述捕获介质包括珠子。

17.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，或根据权利要求12至14中任一项所述的组合物，其中将所述配体缀合至磁性试剂。

18.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中通过所述方法可获得的所述纯化的细胞组合物包含至少50％的胰腺祖细胞。

19.一种结合胰腺祖细胞上的细胞表面标志物的配体用于从源自多能干细胞、诱导多能干细胞和/或胚胎干细胞的细胞群中纯化胰腺祖细胞的用途，其中所述细胞表面标志物为CD177。

20.一种试剂盒，包含结合CD177的配体和用于将多能干细胞、诱导多能干细胞和/或胚胎干细胞分化为定形内胚层细胞群的手段。

21.根据权利要求1至11或15至18中任一项所述的方法，或根据权利要求12至14中任一项所述的组合物，或根据权利要求17所述的用途，其中所述胰腺祖细胞其中所述胰腺祖细胞在细胞表面包含CD177。