[发明专利]细胞培养方法

权利要求书

1.一种产生重组蛋白的方法，其包括：

a.在培养基中培养能够产生重组蛋白的宿主细胞；

b.使培养物进行通过生产阶段，其中重组蛋白由细胞产生，其中在所述生产阶段中，向所述培养物中补充

·半胱氨酸或胱氨酸达到产生的重组蛋白的预期总量的10wt％至30wt％的总量；和/或

·色氨酸达到产生的重组蛋白的预期总量的8wt％至35wt％的总量，

c.以及任选地，从细胞培养基中回收重组蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述培养物中补充半胱氨酸或胱氨酸，其总量达到产生的重组蛋白的预期总量的12wt％至28wt％，诸如产生的重组蛋白的预期总量的12wt％至25wt％，例如12wt％至20wt％。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在所述培养物中补充色氨酸，其总量达到产生的重组蛋白的预期总量的8wt％至30wt％，诸如产生的重组蛋白的预期总量的8wt％至25wt％，例如8wt％至20wt％。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述方法中提供的半胱氨酸或胱氨酸的总量为2.9至12g/(10¹²个细胞)，例如2.9至7g/(10¹²个细胞)，例如5.6至7g/(10¹²个细胞)，其中细胞是指生产阶段结束时预期的完整活细胞计数。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述方法中提供的色氨酸的总量为2.5至7g/(10¹²个细胞)，例如2.5至3.5g/(10¹²个细胞/L)，其中细胞是指生产阶段结束时预期的完整活细胞计数。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过在以下时刻向所述细胞培养基中添加半胱氨酸或胱氨酸和/或色氨酸来达到所述培养物中半胱氨酸或胱氨酸和/或色氨酸的总量：

a.在所述生产阶段开始时，

b.在生产阶段中的任何时间点一次或多次，

c.在整个生产阶段中连续添加，或

d.以a、b和c的任意组合。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法是分批方法，例如补料分批方法。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在生产阶段中通过每天添加来提供半胱氨酸或胱氨酸和/或色氨酸。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在第二天在添加半胱氨酸或胱氨酸之前，例如通过将半胱氨酸或胱氨酸添加降低至5.6至7g/(10¹²个细胞)的水平来在培养物中耗尽半胱氨酸或胱氨酸，其中细胞是指在生产阶段结束时预期的完整活细胞计数。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中在生产后期，即当细胞已经达到最大活细胞密度时，在第二天添加色氨酸之前在培养物中耗尽色氨酸。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在生产阶段中的任何时间点，所述细胞培养基中的所述半胱氨酸或胱氨酸浓度不超过0.9g/L，优选在生产阶段中的任何时间点，其中所述细胞培养基中的所述半胱氨酸或胱氨酸浓度不超过0.3g/L。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在生产阶段中的任何时间点，所述细胞培养基中的色氨酸浓度不超过0.6g/L，优选在生产阶段中的任何时间点，其中所述细胞培养基中的色氨酸浓度不超过0.3g/L。

13.一种方法，其中所述生产阶段进行至少7天，优选至少14天。