[发明专利]细胞及其使用和制备方法

说明书

在本公开的各个方面中，提供了用于避免宿主内免疫排斥的经基因工程改造的干细胞、浆细胞、B细胞，制备它们的方法以及它们的用途。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年3月20日提交的美国临时申请号62/473,564的优先权，该临时申请通过引用整体并入本文。

关于由联邦政府资助研究或研发的声明

不适用。

通过引用并入的材料

序列表作为本公开的一部分，包括包含本发明的核苷酸和/或氨基酸序列的计算机可读取形式。序列表的主题以引用的方式整体并入本文。

技术领域

本公开总体上涉及细胞疗法。

发明背景

针对毁灭性传染病的疫苗代表了人类最大医学突破中的一部分。疫苗的基本原理是使用减毒或灭活载体建立免疫力，这些载体模拟天然病原体，但不会造成活载体感染可能引发的全身性损伤。因此，迄今为止所有成功疫苗的先决条件是人体免疫系统必须固有地能够在面对自然活载体感染时最终产生适应性免疫。在像脊髓灰质炎这样的病例中，在适应性免疫能够控制自然病毒之前造成的损害是不可接受的；尽管如此，最终还是获得了持久的免疫力，并阻止后续感染。

然而，目前全球很多最棘手的传染病都不能通过人体免疫系统有效控制，不能引发抵抗再次感染的持久免疫。例如，HIV利用其突变性建立了不能被清除的慢性感染，如果没有抗病毒药物的帮助，这种慢性感染不能被有效控制。登革病毒感染导致对同一血清型所致的再感染具有持久的免疫力，但实际上，如果该个体再次感染不同的登革热血清型，则会引起比他/她完全初治时引起的疾病严重得多的疾病。同样，流感毒株不断改变自身的基因；因此，针对特定毒株的免疫很少能对随后在时间和空间上传播的所有流感病毒提供完全保护。疟疾的自然感染不一定产生持久免疫，因为同一个体在一生中可以重复感染很多次。类似这样的病原体会带来一个难题：当免疫系统在面对实际感染时本质上无法产生广泛有效的免疫时，设计成模拟天然病原体的疫苗如何引发免疫？创新性的替代策略如结构引导的序贯免疫、基因疗法和细胞基疗法都已被提出，但是后者途径开发得最少。

此外，细胞疗法领域需要避免免疫排斥的免疫抑制技术或细胞技术取得进步。在了解免疫监视和遗传操作方面的进步使得利用细胞修饰的工程改造定制用于避免免疫排斥的细胞成为可能。

发明内容

在本公开的各个方面中，提供了生成浆细胞、经基因工程改造的干细胞、制备用于避免宿主内免疫排斥的浆细胞和经基因工程改造的干细胞的方法，以及它们的使用方法。

本公开的一个方面包括使人类胚胎干细胞(ES细胞)分化成产生治疗剂(例如广泛中和抗体、蛋白质或酶)的可移植浆细胞的方法。在一些实施方案中，该方法包括生成祖细胞(例如生血祖细胞)以及使祖细胞分化为B细胞。

在一些实施方案中，使所述祖细胞分化为B细胞包括：表达由诱导型启动子(任选地，PAX5、EBF1、FOXO1A、BCL11A、TCF3、IKZF1、IRF4、IRF8或SPI1)驱动的B谱系促进遗传因子；将祖细胞与(i)选自一个或多个由Flt3L、SCF和IL-7组成的组的细胞因子和(ii)MS5基质细胞共同培养，持续足以促进B淋巴细胞生成的时间(任选地，达约20天)；或用刺激物活化祖细胞，从而使B细胞分化。

在一些实施方案中，遗传因子任选地选自一个或多个由以下组成的组：PAX5、EBF1、FOXO1A、BCL11A、TCF3、IKZF1、IRF4、IRF8或SPI1。

在一些实施方案中，刺激物选自多西环素或四环素。