[发明专利]细胞及其使用和制备方法

权利要求书

1.一种使人胚胎干细胞(ES细胞)分化为浆细胞的方法，所述方法包括：

生成祖细胞；和

使祖细胞分化为B细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中

所述祖细胞是造血祖细胞或造血内皮细胞；或者

所述浆细胞产生选自蛋白质、广泛中和抗体或酶的治疗剂。

3.如权利要求1所述的方法，其中使所述祖细胞分化为B细胞包括：

表达由诱导型启动子驱动的B谱系促进遗传因子；和

用刺激物激活祖细胞，从而使B细胞分化。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述遗传因子选自一个或多个由PAX5、EBF1、FOXO1A、BCL11A、TCF3、IKZF1、IRF4、IRF8和SPI1组成的组；或者所述刺激物选自多西环素或四环素。

5.如权利要求3所述的方法，所述方法包括将所述祖细胞与(i)选自一个或多个由Flt3L、SCF和IL-7组成的组的细胞因子，和(ii)MS5基质细胞共培养，持续足以促进B淋巴细胞生成的时间。

6.如权利要求1所述的方法，其中将所述人ES细胞用病原体特异性抗体基因编码盒进行核转染。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述病原体特异性抗体盒包含VDJ和VJ序列，所述VDJ和VJ序列选自一个或多个由流感抗体、HIV抗体或黄病毒抗体组成的组。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述包含VDJ和VJ序列的病原体特异性抗体盒选自一个或多个由FI6、VRC07、10E8、N6、3BNC117、EDE1和C10组成的组。

9.一种生成长寿浆细胞的方法，所述方法包括：

(i)将IFNγ或IL-4施用至来源于人ES细胞的B细胞；或者

(ii)将IL-21施用至被工程改造成表达CD40L和BAFF的3T3成纤维细胞。

10.如权利要求9所述的方法，所述方法包括：提供原代扁桃体幼稚B细胞；以及将IL-4或IFNγ引入到所述原代扁桃体幼稚B细胞中。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述长寿浆细胞相对于野生型浆细胞具有增加的抗体、蛋白质或酶分泌；增多的呼吸用线粒体丙酮酸盐；或升高的葡萄糖摄取。

12.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的浆细胞，

其中，

所述受试者具有病毒，并且所述浆细胞表达来自广泛中和所述病毒的抗体的序列；

所述受试者患有酶缺乏症，并且所述浆细胞分泌酶；或

所述受试者患有自身免疫性疾病、神经变性疾病或癌症，并且所述浆细胞表达免疫治疗剂，所述免疫治疗剂任选地选自阿杜那单抗、美罗华或依库珠单抗。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法生成的B细胞或浆细胞。

14.一种经基因工程改造的干细胞，所述经基因工程改造的干细胞包括：

(i)相对于野生型干细胞降低的一种或多种HLA-I和HLA-II的表达；或

(ii)编码导致逃避补体固定、逃避NK细胞识别或逃避吞噬的基因的构建体。

15.如权利要求14所述的经基因工程改造的干细胞，所述经基因工程改造的干细胞包括相对于野生型干细胞增加的一种或多种免疫逃避因子的表达。

16.如权利要求15所述的经基因工程改造的干细胞，其中所述免疫逃避因子选自一个或多个由HLA-E、HLA-G、CD46/Crry、CD47和CD55组成的组。