[发明专利]在S2或S2’口袋中具有突变的枯草杆菌蛋白酶变体

权利要求书

1.一种酶，所述酶是枯草杆菌蛋白酶BPN’变体或其同源物，与由序列编号:2或其同源序列表示的枯草杆菌蛋白酶BPN’相比，所述酶包含以下突变：

-对应于位置75-83的氨基酸的缺失；

-在对应于S221的氨基酸位置处的突变，所述突变对应于S221C或S221硒代半胱氨酸，优选S221C；

-选自下组的至少一种另外的突变，所述组由对应于以下的氨基酸位置组成：F189W、F189Y、S33D、S33T、N218D、N218T、N218E、N62D、N62S、N62W和N62Y；

优选在对应于P225的氨基酸位置处的突变；

其中所述氨基酸位置是根据由序列编号:2表示的枯草杆菌蛋白酶BPN'的序列定义的。

2.根据权利要求1所述的酶，所述酶包含在所述酶的S2'口袋中对应于F189W或F189Y、优选对应于F189W的氨基酸位置处的突变。

3.根据权利要求2所述的酶，其中在对应于N218的氨基酸位置处的氨基酸为N、D或T。

4.根据前述权利要求中任一项所述的酶，所述酶包含在所述酶的S2'口袋中对应于N218D、N218T或N218E、优选对应于N218D的氨基酸位置处的突变。

5.根据前述权利要求中任一项所述的酶，所述酶包含在所述酶的S2口袋中对应于S33D或S33T、优选对应于S33D的氨基酸位置处的突变。

6.根据权利要求5所述的酶，所述酶包含在所述酶的S2口袋中对应于S33D的氨基酸位置处的突变，并且还包含在S2’口袋中对应于N62S的突变。

7.根据权利要求5所述的酶，所述酶包含在所述酶的S2口袋中对应于S33T的氨基酸位置处的突变，并且还包含在S2'口袋中对应于N62W或N62V的突变。

8.根据权利要求5、6或7所述的酶，所述酶还包含对应于M222P、Y217H、P225N、F189W、N218D和I107V的突变。

9.根据前述权利要求中任一项所述的酶，所述酶包含在所述酶的S2口袋中对应于N62D、N62S、N62Y或N62W、优选对应于N62D的氨基酸位置处的突变。

10.根据前述权利要求中任一项所述的酶，其中在选自对应于F189、N218、S33和N62的位置的组的至少两个位置，优选地在三个位置处包含突变，并且其中

在对应于F189的位置处的突变对应于F189Y或F189W；

在对应于N218的位置处的突变对应于N218D、N218T或N218E；

在对应于S33的位置处的突变对应于S33D或S33T；并且

在对应于F62的位置处的突变对应于N62D、N62S、N62W或N62Y。

11.根据权利要求10所述的酶，其中选自对应于F189、N218、S33和N62的位置的组的全部四个位置包含突变，并且其中

在对应于F189的位置处的突变对应于F189Y或F189W；

在对应于N218的位置处的突变对应于N218D、N218T或N218E；

在对应于S33的位置处的突变对应于S33D或S33T；并且

在对应于F62的位置处的突变对应于N62D、N62S、N62W或N62Y。

12.根据前述权利要求中任一项所述的酶，所述酶包含在对应于P225的氨基酸位置处的突变，所述突变选自对应于P225N、P225D、P225S、P225C、P225G、P225A、P225T、P225V、P225I、P225L、P225H和P225Q、优选对应于P225N、P225D、P225S、P225C、P225G、P225A或P225T的氨基酸位置的组。