[发明专利]minor BCR-ABL1基因的检测方法

说明书

本公开提供了包括以下的方法：(1)在具有BCR基因的外显子2至14的一部分的碱基序列或与其互补的碱基序列的修饰核酸的存在下，以获得自对象的核酸试样作为模板、使用具有BCR基因的外显子1的一部分的碱基序列的正向引物、和具有与ABL1基因的外显子2至11的一部分互补的碱基序列的反向引物来进行PCR的步骤；和(2)当通过PCR使核酸扩增时，判断对象具有minor BCR‑ABL1基因的步骤。

技术领域

本申请要求日本专利申请第2017-087666号的优先权，其全部内容通过引用合并于此。

本公开涉及对象中minor BCR-ABL1基因的检测方法以及用于该目的的试剂盒。

背景技术

BCR-ABL1融合基因是在慢性骨髓性白血病(CML)和费城染色体阳性急性淋巴性白血病(Ph+ALL)的患者中发现的染色体异常。表示为t(9；22)的9号染色体和22号染色体之间的染色体易位导致9号染色体的c-ABL1基因(带区域q34)与22号染色体的bcr基因(带区域q11)融合。融合基因编码嵌合 BCR-ABL1蛋白。BCR-ABL1蛋白具有酪氨酸激酶活性，并且通过持续刺激细胞增殖信号和抑制细胞凋亡导致造血干细胞的无限增殖。最近开发的靶向BCR-ABL1蛋白的酪氨酸激酶抑制剂，例如伊马替尼(imatinib)，已改善对 CML和Ph+ALL的治疗结果。

根据BCR的切断点的不同，BCR-ABL1可主要分为Major型 BCR-ABL1(M-BCR-ABL1)和minor型BCR-ABL1(m-BCR-ABL1)。在约95％的CML患者中发现M-BCR，在约20至30％的Ph+ALL患者中发现m-BCR。各个BCR-ABL1基因的表达水平可作为辅助CML和Ph+ALL的诊断或监测治疗效果的指标。本发明人贩售以Major BCR-ABL1 mRNA测定试剂盒为商品名的、用于测定M-BCR-ABL1的表达水平的试剂盒。试剂盒通过一步定量实时RT-PCR测定M-BCR-ABL1的表达水平。非专利文献1公开了一种测定 m-BCR-ABL1的表达水平的方法。

现有技术文献

专利文献

[专利文献1]美国专利第6391592号

非专利文献

[非专利文献1]Gabert J等人Leukemia.2003；17:2318-2357

发明内容

发明要解决的问题

本公开的目的是提供比常规方法更精确的minor BCR-ABL1基因的检测方法。

用于解决问题的方案

本公开的一个方面提供一种检测对象中minor BCR-ABL1基因的方法，其包括：

(1)在具有BCR基因的外显子2至14的一部分的碱基序列或与其互补的碱基序列的修饰核酸的存在下，以获得自对象的核酸试样作为模板、使用具有BCR基因的外显子1的一部分的碱基序列的正向引物、和具有与ABL1基因的外显子2至11的一部分互补的碱基序列的反向引物来进行PCR的步骤；和

(2)当通过PCR使核酸扩增时，判断对象具有minor BCR-ABL1基因的步骤。

本公开的一个方面提供一种用于检测对象中minor BCR-ABL1基因的试剂盒，其包括具有与BCR基因的外显子2至14的一部分互补的碱基序列的修饰核酸、具有与ABL1基因的外显子2至11的一部分互补的碱基序列的反向引物、和具有BCR基因的外显子1的一部分的碱基序列的正向引物。

发明的效果