[发明专利]B细胞工程改造

说明书

本文描述了用于B细胞基因组工程改造和用于表达转基因和/或用于调节B细胞功能的构建体。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年1月26日提交的美国临时申请第62/450,917号的权益，通过引用将该申请全文纳入本文。

技术领域

本公开涉及基因疗法领域，特别是基因组编辑以及靶向递送转基因编码的构建体至B细胞用于表达有益(治疗性)蛋白质。

背景

基因疗法可以用于遗传工程改造细胞，以具有一种或多种失活的基因和/或致使细胞表达之前并未在该细胞中产生的产物(例如，经由转基因插入和/或经由校正内源性序列)。使用转基因插入的实例包括核酸酶介导的修饰，包括插入编码一种或多种新型治疗性蛋白质(包括治疗性抗体)的一种或多种基因，插入编码细胞或个体中缺乏的蛋白质的编码序列，在含有突变的基因序列的细胞中插入野生型基因，和/或插入编码结合核酸如微小RNA或siRNA的序列。这些技术还可以用于敲除内源性基因的表达和/或改变细胞的毒性概况。参见例如，美国专利号9,394,545；9,150,847；9,206,404；9,045,763；9,005,973；8,956,828；8,936,936；8,945,868；8,871,905；8,586,526；8,563,314；8,329,986；8,399,218；6,534,261；6,599,692；6,503,717；6,689,558；7,067,317；7,262,054；7,888,121；7,972,854；7,914,796；7,951,925；8,110,379；8,409,861；美国专利公开号20030232410；20050208489；20050026157；20050064474；20060063231；20080159996；20100218264；20120017290；20110265198；20130137104；

20130122591；20130177983和20130177960和20150056705。

B细胞通过分泌针对各种抗原的抗体在体液免疫中起作用。它们是专业的抗原呈递细胞(APC)并且通过辅助T细胞激活以分化成产生大量抗原特异性抗体的浆细胞。B细胞发育发生在胎儿肝脏和骨髓中，并且B细胞发育中的关键步骤是生成B细胞受体(BCR)，其是包含独特重链和轻链的复杂结构。BCR生成的过程包括在B细胞成熟的祖B(pro-B)细胞阶段期间重排BCR基因重链和轻链中各种免疫球蛋白(Ig)基因区段。重排的重链和轻链成功配对后，祖B细胞成为前B(pre-B)细胞，其中产生的前BCR在前B细胞的细胞表面上表达。通过前BCR的信号转导进一步驱动B细胞发育，进而使前B细胞扩大。最终，大的前B细胞停止增殖并发生额外的轻链重排，导致独特的IgM BCR表达于现在被认为是未成熟B细胞的细胞表面上。然后这些细胞离开骨髓，并在周边作为过渡性B细胞循环。