[发明专利]一种体外糖基工程化红细胞生成刺激蛋白的方法

权利要求书

1.一种体外生产糖基工程化的红细胞生成刺激蛋白的方法，包括以下步骤：

a)提供不含唾液酸的红细胞生成刺激蛋白，

b)用N-乙酰基-葡萄糖胺转移酶B3GNT2处理红细胞生成刺激蛋白，

c)用半乳糖基转移酶处理红细胞生成刺激蛋白，

d)用唾液酸转移酶处理红细胞生成刺激蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b)在锰离子和钙离子存在下进行。

3.根据权利要求1或2所述的方法，步骤b)中红细胞生成刺激蛋白和N-乙酰基-葡萄糖胺转移酶B3GNT2之间的重量比为>1：1。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于该方法包括在步骤b)之后和用半乳糖基转移酶处理之前纯化获得的红细胞生成刺激蛋白的步骤。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于步骤c)在UDP-半乳糖存在下使用半乳糖基转移酶GalT1进行。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于该方法包括在步骤c)之后和用唾液酸转移酶处理之前纯化获得的红细胞生成刺激蛋白的步骤。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于步骤d)使用唾液酸转移酶ST3进行。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中不含唾液酸的红细胞生成刺激蛋白包含相对频率的N-连接聚糖，其包括2％-0％的唾液酸。

9.前述权利要求中任一项所述的方法用于增加红细胞生成刺激蛋白的N-聚糖上聚-N-乙酰基乳糖胺重复的数量的用途。

10.权利要求1至8之一所述的方法用于提供红细胞生成刺激蛋白的用途，所述红细胞生成刺激蛋白的每个N-糖基化位点具有2个或更多个聚-N-乙酰基乳糖胺重复。

11.通过权利要求1至8中任一项所述的方法产生的体外糖基工程化的红细胞生成刺激蛋白，其中每个红细胞生成刺激蛋白的聚-N-乙酰基乳糖胺重复的平均数量大于10。

12.一种红细胞生成刺激蛋白群，其特征在于每个N-糖基化位点上包含多于两个聚-N-乙酰基乳糖胺重复的N-连接聚糖的相对频率大于90％，并且其特征在于每个红细胞生成刺激蛋白的聚-N-乙酰基乳糖胺重复的平均数量大于10。

13.根据权利要求12所述的红细胞生成刺激蛋白群，其中所述红细胞生成刺激蛋白群不含具有零个或一个聚-N-乙酰基乳糖胺重复的红细胞生成刺激蛋白。

14.根据权利要求1至8之一所述的方法、根据权利要求9或10所述的用途、根据权利要求11所述的体外糖基工程化的红细胞生成刺激蛋白、或根据权利要求12或13之一所述的红细胞生成刺激蛋白群，其中所述红细胞生成刺激蛋白是红细胞生成素。

15.权利要求1至8之一所述的方法用于改善红细胞生成刺激蛋白的比活性的用途。