[发明专利]一种细胞冻存液及其应用

权利要求书

1.细胞冻存液，其特征在于，所述的细胞冻存液组分有渗透性保护剂：二甲基亚砜、甘油等；非渗透性保护剂：葡聚糖、海藻糖等；提供能量类试剂：人血白蛋白、马血清、胎牛血清、小牛血清等；余量为培养基，如DMEN培养基、无血清培养等。

2.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述的组分渗透性保护剂二甲基亚砜等的体积百分含量为9％～15％，所述非渗透性保护剂海藻糖或葡聚糖等的体积百分含量为0.5％～1％，所述的人血白蛋白的体积百分含量为1％～5％，所述的马血清、胎牛血清或小牛血清的体积百分含量为10％～20％，余量为DMEN培养基或无血清培养基。

3.根据权利要求1-2所述的细胞冻存液，其特征在于，所述提供能量试剂选自人血白蛋白、马血清、胎牛血清、小牛血清中的至少一种。

4.根据权利要求1-4任一项所述细胞冻存液制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将权利要求3所述的提供能量试剂加入培养基中混匀，得到溶液I；

(2)将权利要求1所述的二甲基亚砜加入混有葡聚糖或海藻糖的培养基中得到溶液II。

5.根据权利要求1-4的冻存液的使用方法为：需要冻存的细胞与溶液I混合均匀，然后把溶液II缓慢加入其中。

6.权利要求1-5任一项所述的细胞冻存液应用在细胞冻存及复苏中。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，冷冻保存细胞的具体方法为：向细胞中加入所述细胞冻存液，得到浓度为1×10⁶～5×10⁷个/管的细胞悬浮液；然后将细胞悬浮液程序降温至-80℃，转入液氮保存。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，冷冻保存的细胞复苏具体方法为：从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；离心；弃去上清液，加入相应细胞的培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述细胞为贴壁细胞和悬浮细胞如：脂肪间充质干细胞、成纤维细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐血间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、NK细胞、CIK细胞、DC细胞、CAR-T细胞等。

10.根据权利要求1-8所述的应用，其特征在于，冻存复苏后细胞存活率在98％以上，各项检测显示细胞功能保持完好、无变异、无致瘤性，可用于各种临床应用细胞的冻存。