[发明专利]一种通过荧光金纳米簇探针检测胆固醇及其浓度的方法、检测胆固醇氧化酶及其浓度的方法

权利要求书

1.一种荧光金纳米簇在荧光法检测胆固醇和/或胆固醇氧化酶中的应用；

所述荧光法检测胆固醇的过程中，同时原位制备荧光金纳米簇，所述原位制备的原料包括胆固醇和胆固醇氧化酶；

所述荧光法检测胆固醇氧化酶的过程中，同时原位制备荧光金纳米簇，所述原位制备的原料包括胆固醇氧化酶和胆固醇；

所述荧光法为非荧光淬灭法。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述荧光法检测胆固醇还包括荧光法检测胆固醇的浓度；

所述荧光金纳米簇的荧光发射强度与胆固醇的浓度成正比；

所述胆固醇的浓度为50～4000μM；

所述荧光金纳米簇包括金纳米簇和配体；

所述荧光金纳米簇的粒径为1～5nm。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光法检测胆固醇氧化酶还包括荧光法检测胆固醇氧化酶的浓度；

所述荧光金纳米簇的荧光发射强度与胆固醇氧化酶的浓度成正比；

所述胆固醇氧化酶的浓度为50～4000μM；

所述配体为聚N,N-二甲基丙烯酰胺；

所述金纳米簇和配体的摩尔比为1：(0.2～4.8)。

4.一种采用荧光金纳米簇荧光法检测胆固醇浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将胆固醇溶液和胆固醇氧化酶溶液混合温育后，得到混合溶液；

2)将上述步骤得到的混合溶液、酸性缓冲液、N,N-二甲基丙烯酰胺和还原剂进行反应后，得到反应液；

3)将上述步骤得到的反应液、第二酸性缓冲液和可溶性金源进行微波反应后，得到具有荧光强度的金纳米簇溶液；

4)采用不同浓度的胆固醇溶液重复上述步骤1)～3)，得到具有不同荧光强度的金纳米簇溶液；

5)建立金纳米簇的荧光强度的数值与胆固醇浓度的定量关系，用于检测待测样品中的胆固醇浓度。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述胆固醇氧化酶溶液的浓度为0.5～2mg/mL；

所述胆固醇溶液与所述胆固醇氧化酶溶液的体积比为(35～40)：(1～5)；

所述温育的温度为40～45℃；

所述温育的时间为2～3h；

所述酸性缓冲液包括磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲溶液和磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液一种或多种；

所述酸性缓冲液的pH值为3.0～6.0；

所述酸性缓冲液的浓度为0.5～2mM；

所述胆固醇溶液与所述酸性缓冲液的体积比为(35～40)：(1～5)。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述胆固醇溶液与所述N,N-二甲基丙烯酰胺的体积比为(35～40)：(1～4)；

所述N,N-二甲基丙烯酰胺的浓度为20～60mM；

所述还原剂包括亚铜溶液、NaHSO₃溶液、Na₂SO₃溶液、Na₂S₂O₃溶液、草酸、葡萄糖溶液、醇溶液和胺溶液中的一种或多种；

所述还原剂的浓度为30～70mM；

所述胆固醇溶液与所述还原剂的体积比为(35～40)：(0.1～1)；

所述反应的时间为10～120min；

所述反应后还包括透析步骤；

所述透析的透析膜的分子量为500～1500Da；

所述透析的时间为12～24h。